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pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:1 kit
  • 货号:LM81801CH
  • 价格: ¥4800/盒
  • 发布日期: 2023-02-14
  • 更新日期: 2024-05-27
产品详请
产地 中国/上海
品牌 LMAI Bio
货号 LM81801CH
用途 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
纯度 %
规格 1 kit
是否进口

pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒

描述

本试剂盒所包含的原核表达载体(pCold-SUMO-10His)是在 pCold-SUMO 载体基础上改造而成,该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌,在低温下(15 度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生 长 缓 慢,使得蛋白合成速度减慢,从而 限度的提高了蛋白正确折叠的几率,提高了蛋白可溶性表达,增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的 SUMO tag 可以极大地提高小分子量蛋白的表达量,而且进一步提高了蛋白的可溶表达几率。同时,TEE 信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。
改进后的 pCold-SUMO-10His 载体,其 SUMO 蛋白标签含有 10 个组氨酸标签(10His tag),使其结合 Ni-NTA 的能力更强。与较早版本的 pCold-SUMO 表达系统相比,pCold-SUMO-10His 表达系统在保留了原有统的蛋白可溶性能生产能力、高特异性剪切能力的情况下,对 Ni-NTA 结合能力的得到明 显 提 高。其对 Ni-NTA 结合能力的提高,在以下三个方面改善了生产重组蛋白的性能:(1)提高了粗蛋白样品中目标蛋白的捕获能力,从而提高纯化产量;(2)在蛋白纯化过程中可以使用更高浓度的咪唑进行漂洗,去杂蛋白的能力明显提升,从而获得更高纯度的重组蛋白;(3)在重组蛋白酶切去除 SUMO标签后,利用 Ni-NTA 去除 SUMO 标签更为 ,获得纯度更高的无标签目标蛋白。

关于宿主菌的使用:本试剂盒配备了两种宿主表达菌感受态细胞,Lyophilized Arctic (DE3)感受态和Lyophilized BL21(DE3) Chaprone 感受态,两种感受态均为冻干品形式可长期保存在-20℃,效价无明 显 下 降(2~10X10e5 cfu/μg)。
通常在质粒载体的构建完成,并测序验证后,可将重组质粒转入该感受态进行蛋白表达。该宿主菌仅为蛋白表达生产用,不可以进行载体构建和质粒的提取制备。由于 pCold-SUMO 系统的高可溶性表达特性,在大多数情况下重组蛋白在 Lyophilized Arctic (DE3)感受态即可获得理想的可溶表达,因此 实验请选用 Lyophilized Arctic (DE3)感受态宿主菌。在 Lyophilized Arctic (DE3)感受态宿主菌可溶表达效果不理想的情况下,再选用操作相对复杂的、带有辅助折叠伴侣分子的 LyophilizedBL21(DE3)Chaprone 宿主菌,该系统可获得 的可溶表达。除此外,pCold-SUMO 系统在常规 BL21(DE3)、BL21(DE3)plys等宿主菌内均可获得可观的可溶性表达。
关于蛋白酶的使用:试剂盒配备了 SUMO 蛋白酶(酵母来源,也称为 UIP 蛋白酶)和 rTEV 蛋白酶,在 步载体构建过程中需要评估、考虑两个蛋白酶的使用策略。SUMO 蛋白酶识别蛋白结构,切割活性高、酶切完全,对于需要去除 Tag的重组蛋白其是 。个别情况下 SUMO 标签的结构会受到 C 端重组目标蛋白的影响,使得 SUMO 蛋白酶对重组融合蛋白的切割效率降低、甚至是无效,此时再选用 rTEV 蛋白酶进行酶切。由于 rTEV 蛋白酶识别氨基酸序列,个别重组融合蛋白会包埋识别序列,因此也会导致蛋白酶切效率下降。由于重组融合蛋白结构的无法预测性,因此在实验过程中两种蛋白酶的酶切均需要测试。无论如何,通常 SUMO 蛋白酶具有更高的效率,是 。本试剂盒配备的 SUMO 蛋白酶可以识别 SUMO标签结构(SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG)切割位点位于 QIGG 之后。SUMO 蛋白酶含有双 His 标签,保证了 SUMO 蛋白酶高亲和力的结合 Ni-NTA,以 限度的去除 SUMO 蛋白酶(分子量约 26kD)。rTEV 蛋白酶可以识别 SUMO 标签后面的 Glu-AsnLeu-Tyr-Phe-Gln-Gly (ENLYFQG)氨基酸序列,并在识别位点 Gln-Gly(QG)之间进行切割,从而去除 SUMO 标签。rTEV 蛋白酶含有 6XHis 标签(分子量约 30kD),可使用 Ni-NTA 纯化介质去除。本试剂盒配备的 pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid 为蛋白表达阳性质粒,该质粒含有 43kD 的目标蛋白,其与SUMO 标签(19kD)融合后分子量约为 62kD。该表达质粒在 Arctic (DE3)中即可获得良好的表达。其可以仅可做为表达、酶切实验的阳性对照品。

组分

2023021410124859459
2023021410130497759

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。


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