PBCV DNA连接酶

描述：

PBCV DNA 连 接 酶 也称为 SplintR 连接酶 或Chorella 病毒 DNA 连接酶，它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA 连接酶的这种活性远远优于传统的 T4 DNA 连接酶，有助于miRNAs 和 mRNAs，包括 SNPs 在内的研究方法的创新。另外，在二代测序和分子诊断等众多领域中，PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强（米氏常数Km = 1 nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此，在 RNA 检测技术中，PBCV DNA 连接酶不失为 选择用酶。

组分

储存：-20℃可保存 3 年。
活性定义：1 单位指 20 μl 反应体系中，1×PBCV 连接酶反应缓冲液，16℃ 条件下，15 分钟内能使 2 pmol 的
DNA:RNA 杂交底物连接反应完成 50%所需的酶量。
应用：
单链 DNA 的连接
基于探针法的 miRNA 的检测
SNP 或剪接体的检测
RASL 分析
反应温度及失活
该酶的 反应温度为 25°C，可在 16-37°C 之间优化，37℃可明 显 提 高反应的特异性；该酶在 65°C 加热 20min 即可失活。

注意事项
1. 1×PBCV Ligation Buffer：50 mM Tris-HCl pH 7.5，5mM MgCl2，0.1mM ATP, 10 mM DTT。
2. 该酶对 ATP 的要求比较宽泛，10-100 μM ATP 范围内都可发挥活性，5 mM Mg2+可显著增加连接产物的量， pH为 7.5-8.0。
3. 该酶对一价阳离子非常敏感，如 NaCl 或 KCl 的浓度应低于 50 mM，100 mM 的 NaCl 会完全抑制连接反应。
4. 该酶的反应温度为16~37°C，随着温度的上升酶活性会提高，但此时腺苷化产物也随之增加， 温度为25℃。
5. 连接效率随着夹板 RNA 长度的减少而降低，当长度小于等于 10nt 时，连接效率为零。
6. 供体的 5’端 个碱基为“A/T”时连接效率 。
7. 受体的 3’端 个碱基为“T”时连接效率 ，3’端
个碱基为“G”时连接效率最差。

使用方法
1.底物和夹板退火
建议反应体系中底物浓度在 50 nM~2 μM 之间，体系中酶的浓度低于 1 μM（该 SplintR 酶为 10 μM）。在连接反应中，酶的浓度可设为底物浓度的 2~3 倍。将等摩尔浓度的底物混合均匀，75°C 2min 后缓慢降温至室温。
2.连接反应

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。