一步法sgRNA 合成试剂盒

描述：

CRISPR/Cas9 是一种由 RNA 指导 Cas 核酸酶对靶向基因进行特定 DNA 修饰的技术，也是细菌和古细菌为应
对噬菌体和外源质粒的攻击而演化来的一种获得性免疫防御机制。此系统的工作原理是通过人工优化的具有引导作用的 sgRNA(Single Guide RNA)引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 sgRNA 配对的靶位点处剪切双链 DNA，引起 DNA 断裂，进而利用生物体内非同源末端修复机制或同源重组机制修复 DNA，导致基因移码突变、替换或删除，致使基因功能丧失。

sgRNA 的体外合成通常有两种策略：一种为构建含特异性序列的转录质粒，另一种则使用合成的 oligo 退火延伸生成含 T7 转录启动子的双链 DNA 分子，进而再使用 T7 RNA 聚合酶进行体外转录，从而获得 sgRNA。利用合成的Oligo 直接制备 sgRNA，具有操作简单快速、可实现高通量等优势，已经成为体外合成 sgRNA 的 方案。Cas9 的切割是通过向导 RNA(gRNA)与靶 DNA 形成约 20bp 碱基的配对，且靶序列的 3’端需要有 PAM 结构(NGG)，再引导Cas9作用实现的。本试剂盒可通过一步反应获得高纯度、高产量的sgRNA，仅需要合成一条含有特定靶标序列的Oligo，可 在 4h 内获得 50~80μg 的 sgRNA。

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