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LAMP Loop DP-Probe (订制品)
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:800T
  • 货号:LM83831-21A
  • 价格: ¥1500/盒
  • 发布日期: 2023-02-07
  • 更新日期: 2024-06-14
产品详请
产地 中国/上海
品牌 LMAI Bio
货号 LM83831-21A
用途 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
纯度 99%
规格 800T
是否进口

LAMP Loop DP-Probe (订制品)

描述:

该 DP-Probe(DisPlaceable Probe)为链置换荧光探针,专用于LAMP 的荧光扩增。Loop DP-Probe 在搭配 HotStart Bst4.2 Basic 试剂时表现出极为出色的特异性,可以大幅降低非特异性扩增。Loop DP-Probe Pair 是将 Loop 引物进行改造(LF/B 任意一条均可),其由两条标记引物退火组成:荧光猝灭引物(5’IBFQ+Tail+Loop)和荧光报告引物(Tail 互补区+3’发光基团),其不发荧光。在 LAMP反应中 Loop 引物渗入到“哑铃”结构,由扩增返回“哑铃”延伸并置换出游离的荧光报告引物,累积产生荧光信号。

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eLAMP DP-Probe 试剂的开发简述
1. 引物的粗筛选
无论是变色、试纸条、荧光法 eLAMP 试剂的开发,前期的测试过程,推荐采用价格较低的液体 HotStart Bst4.2 SYBR Green试剂(货号:A3831-02)进行粗筛选。通常筛选的引物为 3-5 组。
10xeLAMP Mix:FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each.

测试样品:10e3、100、25、10Copies/管,NTC(16-32 重复)
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置于 70°C 反应 45min,1min 收集一次荧光信号。良好的引物组具有 以 下 特 性 (Ct) : 10e3copies =5-10min; 25copies <15min; 10Copies<20min, NTC 均>40min. 以上实验需要反复确认,以确保核心引物的工作效率,否则重新筛选,再进行后续的其它测试。
2. Loop DP-Probe Pair 的制备
根据上述引物组的筛选情况,选取 引物组。在此基础上改造LF 或 LB,改造哪一条效果更佳,必须经过测试。下面以改造 LF为例进行说明。通常提供 25x 的 LF DP-Probe Pair(或自行制备)。注意:(1)测试试剂更改为 HotStart Bst4.2 Basic 试剂。(2)10xeLAMP Mix 引物浓度有调整。
10xeLAMP Mix:FIP/BIP=8 μM each; LB=4 μM;LF=3 μM.
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置于 70°C 反应 45min,1min 收集一次荧光信号(注意根据探针荧光标记,选取正确的荧光通道)。与 SYBR Green 结果相比来看,时间会滞后 1-3min。NTC 的控制会明显提升。此时可进一步做后续的其它项目测试。
3. 如有试剂冻干制备的需求可采用如下几种方案:
(1)A3831-01(液体试剂)+PrimerMix 自行冻干(专业人员使用)。
(2)PrimerMix+A3831-20(引物冻干剂)自行冻干,加入 A3831-03(冻干球)。
(3)A3831-00(HotStart Bst4.2),全程自行冻干(专业人员使用)。
(4)委托 进行全体系冻干。

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。



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