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毕赤酵母感受态制备与转化试剂盒
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:20T
  • 货号:LM82430-20T
  • 价格: ¥888/盒
  • 发布日期: 2023-02-03
  • 更新日期: 2024-05-27
产品详请
产地 中国/上海
保存条件 -20℃
品牌 LMAI Bio
货号 LM82430-20T
用途 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
是否是肿瘤细胞
规格 20T
纯度 99%
是否进口
毕赤酵母感受态制备与转化试剂盒

英文名:Pichia pastoris receptive Preparation and Conversion Kit

储存条件: -20 ℃保存,未开封有效期 24 个月。
产品内容:

2023020311063454355

一、毕赤酵母感受态细胞的制备
1. 活化菌种。-80 ℃保存的菌种在固体 YPD 培养基平板上划线,30 ℃培养 2-4 天。
2. 选取酵母菌落接种到 10 mL 液体 YPD 培养基中,30 ℃摇床过夜培养后将培养物按 1%的接种量接种到
100 mL 液体 YPD 培养基中三角瓶中培养至 OD 值为 0.6-1.0。
注:每 10 mL 菌液可用于一次转化。以下操作步骤适用于 10 mL 菌液。
3. 3,000 rpm 离心 3 min 收集菌体沉淀。
4. 加入 5 mL B1 溶液重悬菌体,3,000 rpm 离心 3 min 收集菌体沉淀。
5. 再加入 200 μL B1 溶液重悬菌体,转移到无菌 1.5 mL 离心管,即为制备好的感受态细胞,可直接用于转化或冻存备用。
6. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后,再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒,或用多层纸包裹放入泡沫盒中,先置于-80 ℃冰箱过夜后,再取出感受态置于-80 ℃冰箱,可保存半年。使用前冰上解冻或直接用于转化。
注:缓慢冷冻会保证良好的转化效率。扩大酵母菌培养体积,相应增加冻存液的使用量,可以一次性制备多只毕赤酵母感受态细胞。
二、毕赤酵母转化
1. 取 0.1-5 μg 质粒 DNA(线性化质粒加入量 5-50 μg)和 10 μL 预变性 Carrier DNA 加入到未融化的感受
态细胞上,置于 30 ℃水浴,每隔 15 s 颠倒混匀,直至感受态细胞刚好完全融化。(融化后及时取出)
2. 加入 1.4 mL B2 溶液颠倒混匀。30 ℃水浴 60 min。
3. 3,000 rpm 离心 3 min 弃上清留菌体沉淀,加入 1 mL B3 溶液重悬菌体。
4. 3,000 rpm 离心 3 min 弃上清留菌体沉淀,加入 100 μL B3 溶液重悬菌体。
5. 将 100 μL 菌液全部涂布到相应的平板培养基,30 ℃恒温培养 3-5 天,直至平板出现酵母克隆。
注意事项:初次使用 Carrier DNA,请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min,然后立即放在冰上,
用后放在-20 ℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻 Carrier DNA。反复冻融 3-5 次后需重新变性 Carrier
DNA。

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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