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物品单位 | 价格 | 品牌 |
---|---|---|
盒 | 568 | LMAI Bio |
- 产地:中国/上海
- 型号:50T
- 货号:LM8051-50T
- 发布日期: 2023-02-02
- 更新日期: 2023-05-30
产地 | 中国/上海 |
保存条件 | RT |
品牌 | LMAI Bio |
货号 | LM8051-50T |
组织来源 | |
细胞形态 | |
是否是肿瘤细胞 | 否 |
CAS编号 | |
规格 | 50T |
保质期 | |
器官来源 | |
免疫类型 | |
品系 | |
用途范围 | 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。 |
生长状态 | |
物种来源 | |
纯度 | 99% |
是否进口 | 否 |
英文名:Yeast Plasmid Preps Kit
储存条件: RT 储存,未开封可保存 24 个月。
产品内容:
产品说明:
本试剂盒用于酵母质粒的小量提取实验,提取过程无需酶解,无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂。本试剂盒使用传统沉淀法纯化,耗时稍长(整个提取过程约需 3 h),但可获得较高的产率。对于大片段质粒(>10 Kb),与市场常规吸附柱纯化方法相比,损耗率较低。由于酵母质粒拷贝数极低,提取所得质粒,无法通过分光光度计或电泳检测。适用于 PCR 检测或者转化大肠杆菌的实验。
准备工作:
预先在 C 液中加入注明量的无水乙醇,颠倒混匀后置于-20 ℃或冰上待用;在 D 液中加入注明量的无水乙醇待用。
操作步骤:
裂解酵母
1. 用离心管收集 1.5 mL 过夜培养好的酵母菌液,12,000 rpm 离心 30 sec,弃上清;
2. 用 100 μL A 液悬浮酵母菌体,加入 0.2 g 玻璃珠;涡旋震荡 5 min,然后再加入 100 μL A 液,继续涡旋震荡 1-2 min;
3. 在 100 ℃水浴或金属浴上保温 3-5 min 后迅速置于冰上冷却;
4. 12,000 rpm 于 4 ℃离心 10 min。
质粒纯化
1. 吸取 100 μL 的上清液至新离心管中,加入 50 μL B 液,-20 ℃放置 1 h;
2. 12,000 rpm 于 4 ℃离心 10 min,吸取上清液 100 μL 到新的离心管中;
3. 上述上清液中加入 2 倍体积的预冷 C 液(确定已经加入无水乙醇),迅速颠倒混匀,置于冰上 15 min,
12,000 rpm 于 4 ℃离心 10 min。
4. 小心吸弃上清,避免触及沉淀;在沉淀中加入 1 ml 的 D 液(确定已经加入无水乙醇),以 12,000 rpm于 4 ℃离心 3 min;
5. 吸弃上清液,沉淀在室温干燥后,加入 20-50 μL 的 ddH20 溶解沉淀;
6. 所得产物可用于 PCR,转化大肠杆菌等后续实验。
注意事项:
1. C 液和 D 液加入乙醇易挥发,用后及时拧紧盖子。
2. 通常酵母质粒拷贝数较低,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计很难检测到。
3. 通过此方法提取的酵母质粒 1-5 μL 可用做 PCR 反应的模板或者用于转化大肠杆菌。
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