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96孔经典酵母质粒小提试剂盒(酶解法+碱裂解法)
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:2P
  • 货号:LM8053-2P
  • 价格: ¥2448/块
  • 发布日期: 2023-02-02
  • 更新日期: 2024-03-04
产品详请
产地 中国/上海
保存条件 -20℃保存
品牌 LMAI Bio
货号 LM8053-2P
是否是肿瘤细胞
规格 2P
保质期 有效期两年
用途范围 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
纯度 99%
是否进口
96孔经典酵母质粒小提试剂盒(酶解法+碱裂解法)

英文名:96-wells yeast plasmid extraction Kit
保存温度:-20保存,开封后根据单品储存条件储存,有效期两年
产品内容:

2023020204095046380

产品说明:
1:酵母杂交筛库后,需要对筛选平板的菌落进行鉴定,由于酵母菌细胞壁以及拷贝数的影响,常规的菌 P方法成功率不稳定。
2:本产品在酵母质粒提取 PE051,PE052 以及阳性克隆检测试剂盒 SK2420 的基础上,致力于解决酵母PCR 成功率的问题,成功率可达 ,并免去玻璃珠震荡带来的人力损耗,一次可以处理 192 个样品,避免了摸索 PCR 条件带来的困扰。
3:一次提取实验,约耗时 90-120min,可以得到 192 个样品的质粒 DNA。所得产物可以满足 PCR 以及大肠杆菌转化实验。
4:本产品提供的酵母培养基为亮氨酸缺陷培养基,适用于 pGADT7 以及 pGADT7-REC 等 leu 筛选标记的粒菌的扩繁。
实验准备:

1:产品储存:收到产品后,将 96 孔培养板(含 SD-leu 培养基)和提取液置于 4℃冰箱;将酶解液置于-20℃
冰箱;其他成分置于室温保存。
2:酵母菌扩繁:将 96 孔培养板(含 SD-leu 培养基)置于超净台中,将平板菌落分别接种于 96 孔中。盖
好硅胶盖。于 28-30℃培养至培养基变浑浊(OD 值大于 0.5,约需要培养 12-24 小时)。
提取步骤一(酶解):
1. 将酶解液置于 37℃溶解(未用完的酶解液可以置于 4℃保存一周,或者-20℃长期保存)。
2. 离心沉淀 96 孔培养板培养所得酵母细胞(根据离心机转调整离心时间至酵母菌完全沉淀)。
3. 在 96 孔培养板每孔加入 200μL 的酶解液重悬酵母菌沉淀,于 37℃摇床(200-250rmp/min)孵育 60min。
注意:30min 时观察一下酵母菌是否沉淀,如沉淀震荡重悬。酶解时间可以延长(2-16h),不影响提结果。
提取步骤二(裂解):
1. 将提取液置于 65℃水浴预热备用。
2. 酶解完成后,每孔酶解产物中加入 600μL 的提取液(此时酶解产物会变澄清,总体积为 800μL)。
提取步骤三(纯化):
1. 准备 96 孔质粒纯化板,置于 96 孔质粒回收板上(暂放,后续回收板用于质粒回收用)。
2. 将裂解产物(每孔 800μL)加入吸附柱中,将 96 孔质粒纯化板转移到用过的 96 孔培养板上(用于废
液回收),室温静置 2min。
3. 将 96 孔质粒纯化板(套于 96 孔培养板中)用 转速离心(例如 4000rmp/min 离心 5min),弃穿透液。
4. 将 96 孔质粒纯化板(套于 96 孔培养板中)每孔加入 600μL 洗涤液用 转速离心(例如 4000rmp/min
离心 5min),弃穿透液。
5. 将 96 孔质粒纯化板(套于 96 孔培养板中)用 转速离心(例如 4000rmp/min 离心 5min),甩干残留液体。
提取步骤四(收集):
1. 此时将洗脱液置于 65-85℃水浴预热。
2. 将 96 孔质粒纯化板套于 96 孔质粒回收板上,每孔加入 50μL 的预热的洗脱液,室温静置 3min。
3. 将 96 孔质粒纯化板(套于 96 孔质粒回收板中)用 转速离心(例如 4000rmp/min 离心 5min)。
4. 穿透液即为所得酵母质粒,取 5μL 用于 50μL 体系的 PCR 反应。取 5-10μL 用于大肠杆菌转化。

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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