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Super酵母感受态制备与转化试剂盒
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:200T
  • 货号:LM82401-200T
  • 价格: ¥1608/盒
  • 发布日期: 2023-02-02
  • 更新日期: 2024-06-14
产品详请
产地 中国/上海
保存条件 -20℃
品牌 LMAI Bio
货号 LM82401-200T
用途 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
是否是肿瘤细胞
规格 200T
纯度 99%
是否进口
Super酵母感受态制备与转化试剂盒

英文名:Super Yeast Transformation Kit

储存条件:-20°C保存,未开封有效期24个月。Y3避免多次冻融: Y1、Y2溶液可2-8 °C保存。
产品内容:

2023020203263507750

产品说明:
Super 酵母感受态制备与转化试剂盒(SK2401)可以完成酿酒酵母感受态制备,感受态冻存,转化实验。 的优点可一次性制备200支感受态,-80 °C冰箱可冻存一 -年,后续酵母转化实验无需重新制备感受态,操作简单快速,该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒(SK2400)基本相同。如需进- 步提高酵母转化效率,可选用Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus (SK2402)或单独购买YPD Plus LiquidMedium (YT0004) ,转化产物用YPD Plus复苏,其转化效率可以提高50- 。
使用方法:
感受态细胞的制备: (按小体积转化制备20支感受态计,可按比例扩大)
1. 活化菌种。-80。C保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30 °C培养2-4天。
2. 挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线,30 °C培养2-4天。
3.待酵母单菌落直径长至2mm时,把酵母细胞接种到3mL液体YPDA培养基中,30°C过夜培养。
4. 天转接到含有50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待0D00达到0.4-0.5, 3000 rpm离心5min,弃上清。(4 °C保存1周内的酵母菌液,用3 mL接种50 mL YPDA培养基过夜培养)
5.用10mLY1溶液重悬沉淀,3000rpm离心5min,弃上清。
6. 加入1mLY2溶液重悬,按50μL分装于1.5 mL无菌冻存管,转文库按600 μuL分装,感受态细胞即制备完毕,可直接用于转化。

7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后,再置于-80 °C冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒,或用多层纸包裹放入泡沫盒中,先置于-80 °C冰箱过夜后,再取出感受态置于-80 °C冰箱,可保存- -年。 使用前室温融化后用于转化。
转化预混液配制:
2023020203274847465
酵母质粒转化:
1.吸取360yuL预混液加入50μL感受态细胞中,反复吹吸沉淀,使酵母细胞完全悬浮于预混液中。
2. 30 °C的水浴锅中热激60 min, 每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。
3. 12.000 rpm离心I5s,弃上清。
4. (可选步骤)用0.5 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 °C摇床震荡培养30-60 min。 12000 rpm离心15s,弃上清。
5. 加入400 μuL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30 °C培养2-4天。
酵母文库转化: (需用 15-50 mL离心管)
1.将2592μL预混液加入到600μuL感受态细胞中,震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。
2. 30 °C的水浴锅中热激90 min, 每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。
3.3000rpm离心5min,弃上清。
4. (可选步骤)用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 °C摇床震荡培养90 min, 3000 rpm离心5min, 弃上清。
5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板,30 °C培养2-4天。
注意事项: .
1.转化全程要求无菌操作。
2. 为了保证转化效率,务必缓慢冻存感受态,感受态不宜直接用液氮冻存。
3.增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。
临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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