英文名：Super Yeast Transformation Kit Plus

储存条件: -20 。C保存，未开封有效期24个月。Y3 避免多次冻融; Y1、Y2溶液可2-8 9C保存。
产品内容:

产品说明:
Super酵母感受态制备与转化试剂盒(SK2401)可以完成酿酒酵母感受态制备，感受态冻存，转化实验。 的优点可一-次性制备200支感受态，-80 °C冰箱可冻存一年， 后续酵母转化实验无需重新制备感受态，操作简单快速，该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒(SK2400)基本相同。如需进一步提高酵母转化效率，可选用Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus (SK2402)或单独购买YPD Plus Liquid Medium (YT0004) ，转化产物用YPD Plus复苏，其转化效率可以提高50- 。
使用方法:
感受态细胞的制备: ( 按小体积转化制备20支感受态计，可按比例扩大)
1. 活化菌种。-80。C保存的菌种在YPDA培养基平板上划线，30 °C培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在 YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线，30 °C培养2-4天。
3.待酵母单菌落直径长至2 mm时，把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中，30 °C过夜培养。
4. 天转接到含 有50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600达到0.4-0.5, 3000 rpm离心5min，弃上清。(4。C保存1周内的酵母菌液，用3mL接种50mLYPDA培养基过夜培养)
5.用10mLY1溶液重悬沉淀，3000rpm离心5min，弃上清。
6. 加入1mL Y2溶液重悬，按50μL分装于1.5 mL无菌冻存管，转文库按600 μL分装，感受态细胞即制备完毕，可直接用于转化。.

7.制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后，再置于-80 °C冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒，或用多层纸包裹放入泡沫盒中，先置于-80 °C冰箱过夜后，再取出感受态置于-80 °C冰箱，可保存- -年。使用前室温融化后用于转化。
转化预混液配制:

酵母质粒转化:
1.吸取360 yuL预混液加入50 μL感受态细胞中，反复吹吸沉淀，使酵母细胞完全悬浮于预混液中。
2. 30 °C的水浴锅中热激60 min, 每10 min混匀- -次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。
3.12,000 rpm离心15s，弃上清。
4. (可选步骤)用0.5 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 °C摇床震荡培养30-60 min。 12000 rpm
离心15s，弃上清。
5. 加入400 μuL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 °C培养2-4天。
酵母文库转化: (需用 15-50 mL离心管)
1.将2592μL预混液加入到600uL感受态细胞中，震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。
2.30。C的水浴锅中热激90min，每10 min混匀- -次。对于部分菌种，延长孵育时间可提高转化效率，但不要超过3小时。
3.3000rpm离心5min,弃上清。
4. (可选步骤)用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 °C摇床震荡培养90 min， 3000 rpm离心5min，弃上清。
5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板，30 °C培养2-4天。
注意事项:
1.转化全程要求无菌操作。
2.为了保证转化效率，务必缓慢冻存感受态，感受态不宜直接用液氮冻存。
3.增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。