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2.5M 3-AT溶液(过滤除菌)
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:5×5mL
  • 货号:LM80930-5×5mL
  • 价格: ¥288/毫升
  • 发布日期: 2023-02-02
  • 更新日期: 2024-05-27
产品详请
产地 中国/上海
保存条件 -20℃储存,有效期 18 个月。
品牌 LMAI Bio
货号 LM80930-5×5mL
用途 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
是否是肿瘤细胞
规格 5×5mL
纯度 99%
是否进口
2.5M 3-AT溶液(过滤除菌)

英文名:2.5M 3-AT Solution

保存条件:-20℃储存,有效期 18 个月。

包装内容:

2023020203163782656

产品简介:
HIS2 作为报告基因时,会有一定程度的泄漏性表达,出现背景过高的现象,一般称作自激活。这时可以在筛选培养基中加入适量的 HIS2 竞争性抑制剂 3-AT(3-amino-1,2,4-triazole),以降低背景;或者增加一个筛选标记 Ade 来进行更加严格的筛选。加入的 3-AT 浓度过高,蛋白间比较弱的相互作用也可能被抑制,因此需要筛选确定 3-AT 的最适浓度。
3-AT 溶液为经过过滤除菌的即用型母液,用于酵母杂交实验抑制本底表达,用以准确筛选出蛋白互作引发的 His 的报告基因的表达。
使用方法:
1. 计算所需平板的数量,计算配置培养基体积;
2. 设置 3-AT 的浓度梯度(建议 10-50 mM 的浓度范围设 3-5 个梯度,常用浓度约 30 mM);
3. 灭菌筛选培养基,待培养基冷却到 55 ℃左右,加入 3-AT 母液,摇匀后倒板;
4. 标记每个平板的 3-AT 浓度,超净台冷却凝胶后,按单位面积单个克隆计算培养物浓度,涂板;
5. 28-30 ℃培养 3-5 天,筛选出 3-AT 浓度,用于后期互做筛选。
注意:
1. 理想情况 10 mM 浓度的 3-AT 平板会有少量生长,20 mM 浓度的 3-AT 不能或极少生长。如果在 80 mM浓度的 3-AT 平板上生长酵母,说明自激活活性太高,不能用于双杂交筛选。
2. 诱饵蛋白能够单独激活报告基因的表达,该蛋白如果是具有转录激活域一个转录因子,需要去掉转录激活结构域。如果不是转录因子但仍具有较强的转录激活活性,需要将诱饵蛋白具有激活活性的区域去除,但这样操作有可能影响蛋白间的互作。

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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