英文名：β-GAL detection Kit（ONPG）

储存条件: -20°C保存， 有效期24个月。
产品简介:
β_半乳糖苷酶(β-GAL) 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β-半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，还具有转半乳糖音的作用。β-GAL 不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还可以多糖代谢、细胞壁组分代谢过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖，在食品工业、生物技术和医药等领域发挥着重要作用。
LacZ是常用的报告基因，作为转染的参照体系。其蛋白产物-半乳糖苷酶(B- galactosidase)性质稳定，活性容易测定。
本试剂盒采用经典的ONPG (o-nitro-phenyl-B-D-galactopyranoside)底物成色法,利用β-GAL 催化无色的ONPG转变成黄色产物的原理,通过对样品405-430 nm范围波长下的吸光度的测定，可获得B-GAL的相对活性。该方法操作简单、结果稳定。.
产品组成:

注:实验前请仔细阅读说明书
注意事项:
需自备Bradford蛋白浓度测定试剂盒、去离子水。
操作步骤:
蛋白提取

一、样品准备.
1.细菌/细胞样本准备:收集1-2 mL (> 107个)细菌或细胞到离心管内，12,000 rpm，4 °C离心5 min,弃上清收集细胞沉淀。
2.组织样本准备:将组织液氮研磨成粉末状，称取约20-60 mg粉末置于冰上待用。
3.液体样本准备:澄清的液体直接检测;若浑浊则离心后取上清检测。
二、蛋白提取
1.用100μL预冷A液(提取液)悬浮沉淀，并快速转移到1.5 mL离心管中。
2.加入0.05 g的玻璃珠，在旋涡震荡器上剧烈震荡混合5-10 min (间歇冰浴冷却)。
3.用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。
4.再加入100μL预冷A液(提取液)到剩余的玻璃珠中，稍加震荡，再次回收提取液。
5.合并两次所得提取液即为总蛋白样品。
6.12,000rpm, 4 °C离心15 min,取上清。提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 。C保存备
7.利用自备的Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
三样品测定
1.酶标仪/分光光度计预热30 min以上，温度设定37°C，调节波长至420 nm，空白组调零。
2.在离心管中依次加入:

注:若AA过小，可以延长保温时间(如: 40 min或更长)，或增加样本上样量V1 (如增至30 pL,则去离子水相应减少)，则改变后的T或V1需重新代入计算公式计算。

四、活性计算
1.无标准品蛋白活性计算方法:

2.自备标准品蛋白活性计算方法:.
1)利用标准浓度PNP标准曲线方程:
2)将检测吸光值带入标准曲线方程;
3)酶活定义:每毫克蛋白每分钟水解1 nmol PNPP产生PNP定义为1个酶活单位。