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经典酵母转化试剂盒
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:200T
  • 货号:LM82400-200T
  • 价格: ¥888/盒
  • 发布日期: 2023-02-02
  • 更新日期: 2024-04-19
产品详请
产地 中国/上海
保存条件 -20℃
品牌 LMAI Bio
货号 LM82400-200T
是否是肿瘤细胞
规格 200T
用途范围 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
纯度 99%
是否进口
经典酵母转化试剂盒

英文名:Yeast Transformation Kit

储存温度:Carrier DNA -20 ℃保存,其它组分可室温保存,未开封有效期 24 个月。
产品内容:

2023020202185858040

产品说明:
出品的经典酵母转化试剂盒主要用于酿酒酵母质粒转化实验,该试剂盒遵循广大用户的使用习惯,分别提供 PEG、LiAc 和 Carrier DNA 溶液,PEG、LiAc 均经过滤除菌,Carrier DNA 经特殊优化处理,更有助于提高质粒 DNA 的转化效率。该试剂盒可根据实际需要灵活配制 1 × LiAc 溶液和转化预混液,既方便使用,又经济实惠。

感受态细胞制备:
1. 活化菌种。-80 ℃保存的菌种在 YPDA 培养基平板上划线,30 ℃培养 2-4 天。
2. 挑取酵母单菌落在 YPDA 培养基平板上划 3-5 mm 的短线,30 ℃培养 2-4 天。
3. 待酵母单菌落长至直径 2 mm 时,把酵母细胞接种到 3 mL YPDA 液体培养基中,30 ℃过夜培养。
4. 天转接到含有 30-50 mL YPDA 液体培养基的三角瓶中继续培养,待 OD600达到 0.4-0.5,3000 rpm离心 5 min,弃上清。
5. 沉淀用 30-50 mL 的无菌的去离子水悬浮。3000 rpm 离心 5 min,弃上清。
6. 沉淀用 1.5 mL 1 × LiAc(150 μL 10 × LiAc Solution 加 1350 μL 无菌水)重悬后转移至 1.5 mL 离心管中,3000 rpm 离心 5 min,弃上清。
注意:10 × LiAc Solution 经过 pH 缓冲,无需添加 TE 作为缓冲剂。
7. 加入 1 mL 1 × LiAc 重悬,小体积转化按照每管 100 μL 分装,用于文库转化不分装。
8. 3000 rpm 离心 5 min,弃上清,感受态细胞即制备完毕。
注意:制备好的感受态 立即使用,在第 8 步离心前,室温放置不应超过 5 小时。
转化预混液配制:

2023020202202280844

酵母质粒转化:
1. 将 360 μL 预混液加入 1 支感受态细胞中,反复吹吸沉淀,使酵母细胞 悬浮于预混液中。
2. 30 ℃的水浴锅中孵育 30 min,每 10 min 混匀一次。
3. (加入 20 μL DMSO,可选)42 ℃的水浴锅中热击 30 min,每 10 min 混匀一次。
4. 12000 rpm 离心 15 s,弃上清液。
5. (可选步骤)用 1 mL YPD Plus Liquid Medium 重新悬浮,30℃摇床震荡培养 30-60 min。12000 rpm 离
心 15 s,弃上清液。
6. 加入 0.1-1 mL 无菌去离子水或 0.9%氯化钠溶液重悬沉淀,涂筛选培养基平板,30 ℃培养 2-4 天。
酵母文库转化:(需用 15-50 mL 离心管)
1. 将 2520 μL 预混液加入到感受态细胞(未分装)沉淀中,震荡使感受态细胞充分重悬。
2. 放置在 30 ℃的水浴锅中孵育 50 min,每 10 min 混匀一次。
3. (加入 160 μL DMSO,可选)放置在 42 ℃的水浴锅中热击 30 min,每 10 min 混匀一次。
4. 3000 rpm 离心 5 min,弃上清液。
5. (可选步骤)用 3 mL YPD Plus Liquid Medium 重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养 90 min,3000 rpm离心5min,弃上清液。
6. 加入 15 mL 无菌去离子水或 0.9% 氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选培养基平板(50 个平板左右),30 ℃
培养 2-4 天。
注意事项:
1. 转化全程需无菌操作。
2. 初次使用 Carrier DNA,请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮沸 5 min,然后立即放在冰上,用后-20℃储存备用。下次使用前在冰上解冻 Carrier DNA。反复冻融 3-5 次后需重新变性 Carrier DNA。
3. PEG 溶液在低温环境下会析出,请于常温环境下完全溶解后使用。
4. 根据质粒浓度增减体积,增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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