英文名：Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit

储存温度：序号 1-7 常温保存；序号 8 需-20℃储存，蓝冰运输
产品组成：（0.5 L/pouch）

产品说明：
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酵母单杂培养基套装 YM1010），含有用于 Y187-pHis2 系统酵母单杂交文库筛选的全套培养基，性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装，每个独立包装可以配制 0.5 L 的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加入 0.5 L 的 ddH2O，然后 121 ℃灭菌 15 分钟即可。无需称量和调整 pH 值。
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit （YM1011）在试剂盒 YM1010 基础上增加了 100 ml 3-AT
溶液（2.5M，过滤除菌）。
实验材料：
酵母菌株：Y187（缺陷基因型 his3-200、trp1-901、leu2-3）

诱饵载体：pHis2-DNA（筛选标记 Trp 报告基因 His）
文库载体：pGADT7-cDNA（筛选标记 Leu）
实验步骤：
一、转化诱饵载体（参考 SK2400 中质粒转化步骤）
1. YPDA 平板培养划线，活化 Y187 酵母菌种；挑酵母菌落于液体 YPDA 培养基摇菌培养；
2. 制备感受态并将 pHis2-DNA 转化进入感受态细胞；
3. SD/-Trp 平板检测转化结果。
二、自激活检测
1. 制备不同 3-AT 浓度梯度的 SD/-His/-Trp 平板（φ150mm），3-AT 的浓度一般设定在 50-100 mM 之间，
并设置不含 3-AT 的对照；
2. 将上述转化产物稀释到单克隆水平（OD 值＜0.002），涂板。
3. 筛选出适宜的 3-AT 浓度。（如某浓度 3-AT 平板上的菌落弱小且稀疏，与对照相比差距明显，且延长培
养时间也不会再生长，即为理想的 3-AT 浓度）
三、互作筛选（具体步骤参考 SK2400 中文库转化步骤）
1. 液体 SD/-Trp 培养基培养诱饵菌株 Y187（pHis2-DNA），制备 Y187（pHis2-DNA）感受态细胞；
2. 将 pGADT7-cDNA 文库转入 Y187（pHis2-DNA）感受态细胞；
3. 转化产物（取 10μL 稀释 10 倍，100 倍，1000 倍）涂 SD/-Leu/-Trp 平板各一块，用于计算转化效率；剩
余转化产物全部涂 SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X 为筛选所得浓度）平板 50 块（φ150mm），培养 3-5
天；
4. 挑取 SD/-His/-Leu/-Trp 平板上克隆，PCR（推荐 SK2420）后测序鉴定；
5. 点对点验证。
培养基配制方法：
1. 一袋培养基干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5 L 去离子水中溶解（琼脂冷水不溶）。
2. 无调整 pH 值，121 ℃高压灭菌15 min。
3. 液体培养基封好口避光、室温储存备用。
4. 固体培养基冷却到50 ℃左右倒入平板，室温凝胶，封口倒置4 ℃保存。
3-AT 的使用方法：
1. 计算所需平板的数量，配制培养基；
2. 设置3-AT 的浓度梯度；
3. 灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55 ℃左右，按设置浓度加入3-AT 母液，摇匀后倒板；
4. 标记每个平板的3-AT 浓度，超净台冷却凝胶后，将转化产物涂板，28-30 ℃培养3-5天。

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。