联系方式
地址:上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
联系人:周经理
电话:021-67680335
手机:13052188602
邮箱:shlmai@163.com
网址:www.shlmai.com
Y187-pHis2系统酵母单杂培养基套装
  • 品牌:LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:1Set
  • 货号:LM81010-1Set
  • 价格: ¥1968/盒
  • 发布日期: 2023-02-02
  • 更新日期: 2024-06-14
产品详请
产地 中国/上海
保存条件 -20℃
品牌 LMAI Bio
货号 LM81010-1Set
用途 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
是否是肿瘤细胞
规格 1Set
纯度 99%
是否进口
Y187-pHis2系统酵母单杂培养基套装

英文名:Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit

储存温度:序号 1-7 常温保存;序号 8 需-20℃储存,蓝冰运输
产品组成:(0.5 L/pouch)

20230202015527991622023020201554002914

产品说明:
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit(酵母单杂培养基套装 YM1010),含有用于 Y187-pHis2 系统
酵母单杂交文库筛选的全套培养基,性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装,每个独立包
装可以配制 0.5 L 的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中,加入 0.5 L 的 ddH2O,
然后 121 ℃灭菌 15 分钟即可。无需称量和调整 pH 值。
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit (YM1011)在试剂盒 YM1010 基础上增加了 100 ml 3-AT
溶液(2.5M,过滤除菌)。
实验材料:
酵母菌株:Y187(缺陷基因型 his3-200、trp1-901、leu2-3)
诱饵载体:pHis2-DNA(筛选标记 Trp 报告基因 His)
文库载体:pGADT7-cDNA(筛选标记 Leu)
实验步骤:
一、转化诱饵载体(参考 SK2400 中质粒转化步骤)
1. YPDA 平板培养划线,活化 Y187 酵母菌种;挑酵母菌落于液体 YPDA 培养基摇菌培养;
2. 制备感受态并将 pHis2-DNA 转化进入感受态细胞;
3. SD/-Trp 平板检测转化结果。
二、自激活检测
1. 制备不同 3-AT 浓度梯度的 SD/-His/-Trp 平板(φ150mm),3-AT 的浓度一般设定在 50-100 mM 之间,
并设置不含 3-AT 的对照;
2. 将上述转化产物稀释到单克隆水平(OD 值<0.002),涂板。
3. 筛选出适宜的 3-AT 浓度。(如某浓度 3-AT 平板上的菌落弱小且稀疏,与对照相比差距明显,且延长培
养时间也不会再生长,即为理想的 3-AT 浓度)
三、互作筛选(具体步骤参考 SK2400 中文库转化步骤)
1. 液体 SD/-Trp 培养基培养诱饵菌株 Y187(pHis2-DNA),制备 Y187(pHis2-DNA)感受态细胞;
2. 将 pGADT7-cDNA 文库转入 Y187(pHis2-DNA)感受态细胞;
3. 转化产物(取 10μL 稀释 10 倍,100 倍,1000 倍)涂 SD/-Leu/-Trp 平板各一块,用于计算转化效率;剩余转化产物全部涂 SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT(X 为筛选所得浓度)平板 50 块(φ150mm),培养 3-5天;
4. 挑取 SD/-His/-Leu/-Trp 平板上克隆,PCR(推荐 SK2420)后测序鉴定;
5. 点对点验证。
培养基配制方法:
1. 一袋培养基干粉倒入三角瓶或培养瓶中,加0.5 L 去离子水中溶解(琼脂冷水不溶)。
2. 无调整 pH 值,121 ℃高压灭菌15 min。
3. 液体培养基封好口避光、室温储存备用。
4. 固体培养基冷却到50 ℃左右倒入平板,室温凝胶,封口倒置4 ℃保存。
3-AT 的使用方法:

1. 计算所需平板的数量,配制培养基;
2. 设置3-AT 的浓度梯度;
3. 灭菌筛选培养基,待培养基冷却到55 ℃左右,按设置浓度加入3-AT 母液,摇匀后倒板;
4. 标记每个平板的3-AT 浓度,超净台冷却凝胶后,将转化产物涂板,28-30 ℃培养3-5天。

临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

联系方式
手机:13052188602
Q Q:
手机访问官网
Copyright © 2024 上海联迈生物工程有限公司 XML 技术支持: 盖德化工网   食品商务网