产品规格:50T

保存条件:-20℃避光保存，有效期 12 个月。

产品简介：

上个世纪 70 年代，Kristensopn 和 Olsson 报道了 HRP 可神经末梢摄取，经轴浆逆行运输至神经元胞体，经组织化学方法可显示出神经元的轮廓，从而开发出 HRP 追踪神经元示踪技术，即为 HRP 法。DAB 即 3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下, DAB 会产生棕色沉淀，该棕色沉淀不溶于水和乙醇，显色后呈棕色，可在显微镜下观察。
神经 HRP 示踪显色试剂盒(DAB 法)是动物经麻 醉、注入 HRP 后，游离或络合型的 HRP与氧化剂反应生成络合物，该络合物氧化供氢的 DAB 显色剂，呈棕色，在显微镜下清晰可见。该显色液仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：

使用方法：
(一)准备工作
1. 动物麻 醉：多用(3.5%)戊巴比妥钠作为麻 醉剂，大鼠的麻 醉剂量为 0.25-0.35ml/100g。
2. 导入 HRP：有压力注射法、电泳法以及周围神 经 系 统的注射涂抹等法。
3. 确定动物存活期。
4. 动物灌注：麻 醉后，经左心室升主动脉插管行心内灌注固定。先用生理盐水或 PBS快速灌注。随后用 4%的多聚甲醛固定液灌注，先快后慢，时间控制在 30-40min。 用 10%蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)。
5. 取材：取组织置于 20%的蔗糖磷酸盐缓冲液中，切片厚度 40μm，存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。(二)显色反应
1. 配制 DAB 孵育液：取适量的 DAB assay buffer 和 DAB 显色液，按 DAB assay buffer：DAB 显色液=39:1 的比例混合，即为 DAB 孵育液，即配即用，不宜保存。
2. 配制 DAB 显色工作液：取适量的 DAB 孵育液和 DAB 增强剂，按 DAB 孵育液：DAB增强剂=2000～8000：1 的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定)，即为 DAB显色工作液，即配即用，不宜保存。
3. 配制 1×DAB Wash buffer：取适量的 DAB Wash buffer(20×)，按 DAB Wash buffer：蒸馏水=1:19 的比例混合，即为 1×DAB Wash buffer。室温保存，6 月有效。
4. 切片用蒸馏水清洗 3 次，每次 2min。
5. 切片入 10ml DAB 孵育液(提前 20℃温育)，避光孵育 20min，其间不断晃动。
6. 切片入 10ml DAB 显色工作液(提前 20℃温育)，避光孵育 20min，其间不断晃动。
7. 漂洗：取 10ml 左右的 1×DAB Wash buffer 漂洗切片 2-3 次，每次 5min。
8. 贴片，载玻片用铬明矾明胶包被，室温空气干燥。
9. 脱水、透明、中性树胶封片，显微镜下观察棕色反应。
注意事项：
1. 如果出现高的反应背景或沉淀，表明 DAB 底物反应过于强烈。
2. 所用器皿必须洁净，避免含有氧化剂或还原剂，否则会产生非特异性反应。
3. DAB 显色液避免反复冻融，以免显色效率下降。
4. DAB 增强剂注意密闭保存，否则显色效率下降。

只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。