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神经HRP示踪显色试剂盒(TMB法)
物品单位 价格 品牌
460 LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:50T
  • 货号:LM80200S
  • 发布日期: 2022-12-29
  • 更新日期: 2023-01-30
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 LMAI Bio
货号 LM80200S
用途范围 上个世纪 70 年代,Kristensopn 和 Olsson 报道了 HRP 可神经末梢摄取,经轴浆逆行运输至神经元胞 体,经组织化学方法可显示出神经元的轮廓,从而开发出 HRP 追踪神经元示踪技术,即为 HRP 法。
英文名称
纯度 99%
CAS编号
规格 50T
保质期
是否进口
神经HRP示踪显色试剂盒(TMB法)
Neural HRP tracer chromogenic kit (TMB method)

产品规格:50T

保存条件:2-8℃避光保存,有效期 12 个月。

产品简介:

上个世纪 70 年代,Kristensopn 和 Olsson 报道了 HRP 可神经末梢摄取,经轴浆逆行运输至神经元胞体,经组织化学方法可显示出神经元的轮廓,从而开发出 HRP 追踪神经元示踪技术,即为 HRP 法。3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂,能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中,为稳定的无色溶液,与适量过氧化脲或双氧水与缓冲液混匀后,与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物,极易观察,在辣根过氧化物酶的催化下, TMB 会产生蓝色沉淀,该沉淀不溶于水和乙醇,显色后呈蓝色,可在显微镜下观察。
神经 HRP 示踪显色液(TMB 法)是动物经麻 醉、注入 HRP 后,游离或络合型的 HRP 与氧化剂反应生成络合物,该络合物氧化供氢的 TMB 显色剂,呈蓝色,在显微镜下清晰可见,该检测法较 DAB 法灵敏。
产品组成:

2022122911175302754

使用方法:
(一) 准备工作
1. 动物麻 醉:多用(3.5%)戊巴比妥钠、速眠宁或 10%水合氯醛等作为麻 醉剂,对于戊巴比妥钠大鼠的麻 醉剂量为 0.25~0.35ml/100g。
2. 导入 HRP:有压力注射法、电泳法以及周围神 经 系 统的注射涂抹等法。
3. 确定动物存活期。
4. 动物灌注:麻 醉后,经左心室升主动脉插管行心内灌注固定,先用生理盐水或 PBS 快速灌注,随后用 4%的多聚甲醛固定液灌注,先快后慢,时间控制在 30-40min, 用 10%蔗糖磷酸缓冲液(pH7.4)灌注。
5. 取材:取组织置于 20%的蔗糖磷酸盐缓冲液中,切片厚度 40μm,存于蔗糖磷酸盐缓冲液备用。
(二)显色反应
1. 配制 TMB 孵育液:取适量的 TMB assay buffer 和 TMB 显色液,按 TMB assay buffer : TMB 显2 / 2色液= 39 : 1 的比例混合,即为 TMB 孵育液,即配即用,不宜保存。
2. 配制 TMB 显色工作液:取适量的 TMB 孵育液和 TMB 增强剂,按 TMB 孵育液: TMB 增强剂=2000~8000 : 1 的比例混合(具体比例应根据具体时间摸索确定),即为 TMB 显色工作液,即配即用,不宜保存。
3. 配制 1×TMB Wash buffer:取适量的 TMB Wash buffer(20×),按 TMB Wash buffer : 蒸馏水=1 : 19 的比例混合,即为 1×TMB Wash buffer。室温保存,6 月有效。
4. 切片用蒸馏水清洗 3 次,每次 2min。
5. 切片入 10ml TMB 孵育液(提前 20℃温育),避光孵育 20min,其间不断晃动。
6. 切片入 10ml TMB 显色工作液(提前 20℃温育),避光孵育 20min,其间不断晃动。
7. 漂洗:取 10ml 左右的 1×TMB Wash buffer 漂洗切片 2-3 次,每次 5min。
8. 贴片,载玻片用铬明矾明胶包被,室温空气干燥。
9. 脱水、透明、中性树胶封片,显微镜下观察蓝色反应。
注意事项:
1. 如果出现高的反应背景或沉淀,表明 TMB 底物反应过于强烈。
2. 所用器皿必须洁净,避免含有氧化剂或还原剂,否则会产生非特异性反应。
3. TMB 显色液避免反复冻融,以免显色效率下降。
4. TMB 增强剂注意密闭保存,否则显色效率下降。

只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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