产品规格:100ml

保存条件:4℃避光保存，有效期 12 个月。

产品简介：

伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式：C34H24N6Na4O14S4，分子量：960.80，CAS：314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小与血浆白蛋白相近，而且在血液中与血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血 脑 屏 障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。伊文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量，也可作动脉插管的定位。正常情况下血浆白蛋白无法透过血 脑 屏 障，所以染色后如果神 经 系 统 血 脑 屏 障完整，与血浆白蛋白结合的依文思蓝无法使其着色。相反，如果神 经 系 统 血 脑 屏 障被破坏，依文思蓝就可以进入神 经 系 统并使其着色。

在荧光波长 470nm、540nm 处有强峰，680 nm 处有弱峰。可以使用化学透析法和比色法进行检测。
伊文思蓝与台盼蓝都是细 胞 活 性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较 的定量，其中 0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。本产品为伊文思蓝染色液（Evans Blue Stain，0.5%）。
自备材料：
1. 注射器、组织匀浆器
2. PBS
3. 三氯乙酸或丙酮
使用方法：
(一)血 脑 屏 障通透性
1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静 脉注射 Evans Blue Stain (0.5%)数秒至 1 分钟内，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取目的脑组织。
2. 脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆, 1000g 离心 15min。
3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育 18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室温孵育 24h。
4. 1000g 离心 20～30 min 或 2000g 离心 15min。5. 取上述溶液 1～2ml，用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不
同梯度的标准依文思蓝的 OD 值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。
(二) 活细胞染色
1. 取 100μl 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内，入 100μl Evans Blue Stain 轻轻混匀，染色 3min(染色时间可适当延长，但不宜超过 10min)。
2. 吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较 地进行定量，每个细胞样品至少数 500 个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。
细胞存活率计算公式如下：
细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×
(三) 种子染色
1. 用刀片做横切和沿种胚中央准确纵切，入染色液染色 3-5min。
2. 蒸馏水中浸泡 20-60min，视脱色程度而定。
注意事项：
1. Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性，请小心防护。
2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。
3. 血 脑 屏 障通透性实验中，Evans Blue Stain 注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。
4. 采用低温冷冻离心机进行离心。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。