DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Lys

储存条件：常温密封，长期不用建议 2-8 ℃储存
运输温度：常温运输
注意：
1. 附表内没有提供数据的培养基产品加入量参照产品标签或 Coolaber 。
2. 培养基易吸潮，开封后务必密封保存。
酵母培养基的配制：
（1）Rich Liquid Media (Broth)
1. 取 50 克YPD 或者YPDA（PM2011 添加了硫酸腺嘌呤）加 1 L去离子水，搅拌溶解。
2. pH 值调至 6.5（可省步骤）。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基。
（2）Rich Plating Media with Agar
1. 取 70 克YPD Agar 或者YPDA Agar（PM2021 添加了硫酸腺嘌呤）加 1 升去离子水，搅拌溶解（琼脂在高压灭菌过程中溶解）。
2. pH 值调至 6.5（可省步骤）。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 冷却到 50 ℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在
4 ℃冰箱。
（3）SD Media
1. 根据下表，在1 L 去离子水中加入相应量的Minimal SD Base和DO Supplement，搅拌溶解。或选择复配好的产品（独立包装，即拆即用）。
2. 无需调整 pH 值。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 4 ℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
（4）SC Media
1. 根据下表在900 mL去离子水中加入相应量的 YNB和DO Supplement
（缺陷型氨基酸混合物），搅拌溶解。或选择复配好的产品。
2. 调pH至5.8（复配好的产品无需调整）。121 ℃高压灭菌15分钟。
3. 4 ℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
4. 使用前加入100 mL已过滤除菌的20%葡萄糖溶液（或其它碳源），混匀。
5. 如需配制平板，应在 步加入琼脂，20g/L。
注：SC Media 是不含葡萄糖的SD Media。葡萄糖高温灭菌会有碳化现象，控制好灭菌温度和时间，葡萄糖的微量碳化对实验影响并不大。没有特别要求一般建议用SD Media。
（5） SD Agar Media
1. 根据下表，在 500 mL 去离子水中加入相应量 Minimal SD Agar Bas和DO Supplement（缺陷型氨基酸混合物）搅拌溶解（琼脂在高温灭菌过程中溶解）。或选择复配好的产品（独立包装，即拆即用）。
2. 无需调整 pH 值。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 冷却到 50 ℃把培养基倒入平板中，室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在 4 ℃冰箱。
注意事项：
1. 全系复配好的 SD/SC Media 无需调整 pH 值，DO Supplement 与 YNB或其它品牌产品搭配做固体培养基使用时，需调整 pH 值至 5.8。
2. GAL1 启动子诱导表达要选用 Minimal SD Agar Base Gal/Raf 培养基。
3. 在配制酵母缺陷培养基时，建议配成SD Media 或 SD Agar Media，虽然葡萄糖在灭菌时会有碳化变色现象，培养基变为浅黄到深褐色不等，但对酿酒酵母的生长不会产生严重影响。
4. 若实验要求不能出现糖的碳化现象，或者需要添加其它碳源，也可选择 SCMedia，在灭菌后加入过滤除菌的葡萄糖（ SL6450）或其它碳源。
5. Minimal SD Agar Base Gal/Raf 培养基高温高压下可能对诱导效果产生抑止，尤其是在做表达调节介导的功能互补实验需特别注意！
常见问题：
1. 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？
在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌株可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于 1 mL 的SD/-Trp，接着将重悬液平铺于 5 个φ100mm 的 SD/-Trp 平板，30 ℃温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 mL0.5×YPDA 刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。
2. 如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达，该如何处理？
该蛋白很可能有转录激活域，是个转录因子。可以通过基因重组切掉转录激活域，然后重新检测其是否自激活，但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。
3. 转化效率太低怎么办？
1) 检测一下 DNA 的纯度，如果可以的话，重新纯化。
2) DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。
3) 不适当的培养基，重新配制培养基，并做对照转化。
4) 检测 pGBT9 对照载体的转化效率，放置于 SD/-Trp 平板上，转化效率应该在1×10
5 colonies/μg DNA 以上。
4. 杂交效率不高，该如何处理？
在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计数板对细胞进行计数。密度应该在 1×109/mL。一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻
毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。