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DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Lys
物品单位 价格 品牌
698 LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:20g
  • 货号:LM82550M
  • 发布日期: 2022-12-29
  • 更新日期: 2023-01-30
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 LMAI Bio
货号 LM82550M
用途范围 DO Supplement 亦即Dropout Supplement,为一系列缺陷型氨基酸混合物(包含核苷酸)的统称,将相应的缺陷型氨基酸混合物添加到Minimal SD Base(YNB和葡萄糖的混合物)中配制成缺陷型明确的筛选培养基。
英文名称 DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Lys
纯度 99%
CAS编号
规格 20g
保质期 常温密封,长期不用建议 2-8 ℃储存
是否进口
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Lys
储存条件:常温密封,长期不用建议 2-8 ℃储存
运输温度:常温运输
注意:
1. 附表内没有提供数据的培养基产品加入量参照产品标签或 Coolaber 。
2. 培养基易吸潮,开封后务必密封保存。
酵母培养基的配制:
(1)Rich Liquid Media (Broth)
1. 取 50 克YPD 或者YPDA(PM2011 添加了硫酸腺嘌呤)加 1 L去离子水,搅拌溶解。
2. pH 值调至 6.5(可省步骤)。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 避光、室温条件下储存灭菌培养基。
(2)Rich Plating Media with Agar
1. 取 70 克YPD Agar 或者YPDA Agar(PM2021 添加了硫酸腺嘌呤)加 1 升去离子水,搅拌溶解(琼脂在高压灭菌过程中溶解)。
2. pH 值调至 6.5(可省步骤)。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 冷却到 50 ℃把培养基倒入平板中,室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在
4 ℃冰箱。
(3)SD Media
1. 根据下表,在1 L 去离子水中加入相应量的Minimal SD Base和DO Supplement,搅拌溶解。或选择复配好的产品(独立包装,即拆即用)。
2. 无需调整 pH 值。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 4 ℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
(4)SC Media
1. 根据下表在900 mL去离子水中加入相应量的 YNB和DO Supplement
(缺陷型氨基酸混合物),搅拌溶解。或选择复配好的产品。
2. 调pH至5.8(复配好的产品无需调整)。121 ℃高压灭菌15分钟。
3. 4 ℃冰箱避光储存已经灭菌的液体培养基。
4. 使用前加入100 mL已过滤除菌的20%葡萄糖溶液(或其它碳源),混匀。
5. 如需配制平板,应在 步加入琼脂,20g/L。
注:SC Media 是不含葡萄糖的SD Media。葡萄糖高温灭菌会有碳化现象,控制好灭菌温度和时间,葡萄糖的微量碳化对实验影响并不大。没有特别要求一般建议用SD Media。
(5) SD Agar Media
1. 根据下表,在 500 mL 去离子水中加入相应量 Minimal SD Agar Bas和DO Supplement(缺陷型氨基酸混合物)搅拌溶解(琼脂在高温灭菌过程中溶解)。或选择复配好的产品(独立包装,即拆即用)。
2. 无需调整 pH 值。121 ℃高压灭菌 15 分钟。
3. 冷却到 50 ℃把培养基倒入平板中,室温使其凝固。封口膜封好后倒置保存在 4 ℃冰箱。
注意事项:
1. 全系复配好的 SD/SC Media 无需调整 pH 值,DO Supplement 与 YNB或其它品牌产品搭配做固体培养基使用时,需调整 pH 值至 5.8。
2. GAL1 启动子诱导表达要选用 Minimal SD Agar Base Gal/Raf 培养基。
3. 在配制酵母缺陷培养基时,建议配成SD Media 或 SD Agar Media,虽然葡萄糖在灭菌时会有碳化变色现象,培养基变为浅黄到深褐色不等,但对酿酒酵母的生长不会产生严重影响。
4. 若实验要求不能出现糖的碳化现象,或者需要添加其它碳源,也可选择 SCMedia,在灭菌后加入过滤除菌的葡萄糖( SL6450)或其它碳源。
5. Minimal SD Agar Base Gal/Raf 培养基高温高压下可能对诱导效果产生抑止,尤其是在做表达调节介导的功能互补实验需特别注意!
常见问题:
1. 如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的,该怎么办?
在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌株可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于 1 mL 的SD/-Trp,接着将重悬液平铺于 5 个φ100mm 的 SD/-Trp 平板,30 ℃温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起。用5 mL0.5×YPDA 刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。
2. 如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达,该如何处理?
该蛋白很可能有转录激活域,是个转录因子。可以通过基因重组切掉转录激活域,然后重新检测其是否自激活,但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。
3. 转化效率太低怎么办?
1) 检测一下 DNA 的纯度,如果可以的话,重新纯化。
2) DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。
3) 不适当的培养基,重新配制培养基,并做对照转化。
4) 检测 pGBT9 对照载体的转化效率,放置于 SD/-Trp 平板上,转化效率应该在1×10
5 colonies/μg DNA 以上。
4. 杂交效率不高,该如何处理?
在杂交中,预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时,应挑选大的、新鲜的克隆进行培养,经过离心和重悬后,再使用血球计数板对细胞进行计数。密度应该在 1×109/mL。一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻
毒性,同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。


只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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