产品规格:100T

保存条件:-20℃避光保存，有效期 12 个月。

简介

支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit) 是一种经典的利用 DNA 荧光染色法检测支原体污染的试剂盒。这种染料会结合到 DNA 的 A-T 富集区域，因为支原体的DNA 中 A-T 含量高（55％～80％），所以可将其染色而被检到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的 DNA 染色斑，说明有支原体污染。Hoechst 33258 的 激发波长为 346nm， 发射波长为 460nm；Hoechst
33258 和双链 DNA 结合后， 激发波长为 352nm， 发射波长为 461nm。
组成：

自备材料：
1. 可观察蓝光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜
2. PBS 或生理盐水
3. 载玻片、盖玻片
4. 预冷固定液：预冷的 70%乙醇
使用说明：
(一) 贴壁细胞
1. 被检细胞接种于无菌的 6 孔细胞培养板中，接种密度为 1-2×104。同时，接种正常无支 原 体 感 染的同种细胞，作为阴性对照。
2. 2-5 天后，先吸去培养液，再加入 1ml 的固定液，静置 20min。
3. 吸去固定液，晾干。
4. 于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置 15-20min 或室温静置 20～30min。5. 吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。
6. 荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
(二) 悬浮细胞
1. 收集需检测的细胞，1500rpm，5min。
2. 将收集的细胞涂片于载玻片上，再加 1ml 的固定液，静置 20min。
3. 吸去固定液，晾干。
4. 于每孔中加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置 15～20min 或室温静置 20～30min。
5. 吸去 Hoechst 33258 工作液，用无菌水洗涤玻片 3 次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。
6. 荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
结果判断（参考）：
阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。
阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。
注意事项：
1. 固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。
2. 支原体检测时，好用不含抗生素的培养液培养 2～3 代，这样容易避免假阴性结果。
3. 本试剂盒用于 6 孔板检测时，可以进行 50 次检测反应。
4. Hoechst 33258 染色液对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。