产品规格:100T

保存条件:-20℃避光保存，有效期 12 个月；避免反复冻融。

简介

自噬 (autophagy) 是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。
丹酰尸胺 (Dansylcadaverine, MDC ) 是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长 355-380nm，阻断滤光片波长 512-530nm。MDC 染色液适用于培养细胞的荧光自噬染色，又可用 FACS 检测细胞自噬发生的比例，可与 EB 合用双染。
产品组成：

使用说明：
(一) 玻片法：
1. 收集细胞，用 300～500μl 的 Wash buffer 清洗细胞 1 次，800～1000g 离心 5min，弃上清。
2. 加入适量的 Stain buffer 重悬细胞，计数并调节细胞浓度至 106/ml。
3. 取 90μl 细胞悬液至新的 1.5ml 离心管中，加入 10μl 的 MDC Stain(10×)，轻轻混匀。
4. 37℃或室温避光染色 15～60min。
5. 800～1000g 离心 5min，弃上清，收集细胞，用 300～500μl 的 Wash buffer 清洗细胞 2 次，800～1000g 离心 5min，弃上清。
6. 加入 100μl 的 Wash buffer 重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
7. 荧光显微镜下观察，计数并拍照；也可用流式细胞仪检测药物干预组 MDC 阳性细胞百分比。
(二) 96 孔板法：
1. 轻轻吸除 96 孔板中的培养液，各孔加入 10μl 的 MDC Stain(10×)和 90μl 的 Stain buffer，37℃ 5%CO2 避光孵育 15～60min。
2. 各孔加入 100μl Wash buffer 清洗 2～3 次。
3. 荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。
(二)MDC 与 EB 双染法：
1. 收集细胞，用 300～500μl 的 Wash buffer 清洗细胞 1 次，800～1000g 离心 5min，弃上清。
2. 加入适量的 Stain buffer 重悬细胞，计数并调节细胞浓度至 106/ml。2 / 2
3. 取 90μl 细胞悬液至新的 1.5ml 离心管中，加入 10μl 的 MDC Stain(10×)和 0.2uM EB 染色液，轻轻混匀。
4. 滴加于在玻片上，室温避光染色 15～30min，加盖玻片。
5. 荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。
染色结果：
正常细胞：细胞被均匀染成黄绿色荧光
凋亡细胞：染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒
注意事项：
1. MDC Stain 和 EB，试剂有一定毒性，请小心操作。
2. 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
3. Wash buffer 可用 PBS 代替。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。