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Hoechst 33342/PI细胞凋亡染色试剂盒
物品单位 价格 品牌
320 LMAI Bio
  • 产地:中国/上海
  • 型号:100T
  • 货号:LM80007S
  • 发布日期: 2022-12-27
  • 更新日期: 2023-01-30
产品详细说明
产地 中国/上海
品牌 LMAI Bio
货号 LM80007S
用途范围 Hoechst 33342/PI 细胞凋亡染色试剂盒(Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit)是一 种采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)双荧光染色方法进行细胞周期与 细胞坏死分析的检测试剂盒。
英文名称
纯度 99%
CAS编号
规格 100T
保质期
是否进口
Hoechst 33342/PI细胞凋亡染色试剂盒
Hoechst 33342/PI apoptotic Staining Kit

产品规格:100T

保存条件:-20℃避光保存,有效期 6 个月。避免反复冻融。

简介

Hoechst 33342/PI 细胞凋亡染色试剂盒(Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit)是一种采用 Hoechst 33342 和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)双荧光染色方法进行细胞周期与细胞坏死分析的检测试剂盒。单纯的 PI 染色能够观察 DNA 直方图上凋亡细胞的亚 G1 峰,但只能代表 G0/G1 期发生凋亡,无法观察 S 期和 G2 期发生的细胞凋亡。而且,细胞经过固定后无法对活细胞和死细胞进行区分。
Hoechst 33342 可以穿透细胞膜,进入正常细胞和凋亡细胞,与 DNA 结合,能在紫外线下显示蓝色荧光,而且染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。PI 不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失, PI 可以穿透细胞膜使坏死细胞着色产生红色荧光。
Hoechst 33342/PI 双染后,可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。在二元直方图上,正常细胞对 Hoechst 33342 具有拒染性,呈弱蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst 33342+/PI+);凋亡细胞对 Hoechst 33342 具有嗜染性呈强蓝色荧光+弱红色荧光(Hoechst 33342++/PI+);坏死细胞对 PI 具有嗜染性,呈弱蓝色荧光+强红色荧光(Hoechst 33342+/PI++)。本试剂盒亦可用荧光显微镜进行观察。检测细胞含量范围一般为 0.1~1×106之间。
组成:

2022122711543873337

自备材料:
流式细胞仪或荧光显微镜、PBS、细胞计数板。使用说明:
1. 细胞样品的制备:
⑴ 贴壁细胞:
a. 小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。
b. 用胰蛋白酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。
c. 收集上述细胞悬液到离心管内。
d. 4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul培养液,以免吸走细胞。
e. 加入约 1ml 提前预冷的 PBS,重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。
f. 4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。
g. 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul PBS,以免吸走细胞。
h. 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
⑵ 悬浮细胞:
a. 4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。
b. 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul 培养液,以免吸走细胞。
c. 加入约 1ml 提前预冷的 PBS,重悬细胞,并转移至 1.5ml 无菌离心管。
d. 4℃,1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底。
e. 小心吸取上清并丢弃,可留大约 50ul PBS,以免吸走细胞。
f. 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
2. 重悬细胞:
取上述收集好的 0.1~1×106个细胞,加入 0.9ml Cell Stain Buffer 工作液,重悬细胞沉淀。
3. Hoechst 33342/PI 染色: 
⑴ 一步法:分别加入 5ul Hoechst 33258 Stain 和 5ul PI Stain,轻轻混匀,置于冰浴或4℃,孵育 20~30min。
⑵ 两步法:
a. 加入 5ul Hoechst 33342 Stain,置于 37℃水浴,孵育 5~15min
b. 置于冰水中冷却后,4℃ 1000g 离心 3~5min,使细胞沉到管底,弃上层染色液。
c. 加入 0.9ml Cell Stain Buffer 工作液,重悬细胞沉淀。
d. 加入 5ul PI Stain,置于冰浴或 4℃,孵育 5~15min。
e. 轻轻混匀,置于冰浴或 4℃,孵育 20~30min。
4. 检测与分析:
用流式细胞仪在激发波长 400~500nm 检测蓝色荧光,在大于 630nm 处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA 含量分析和光散射分析。如果使用荧光显微镜检测,检测前 4℃ 1000g 离心 3~5min 沉淀细胞,用 PBS 洗涤一次,再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测,亦可不收集细胞,弃培养液后直接依次按照上述比例加入试剂(A)、试剂(B)、试剂(C),冰浴或 4℃染色 20~30 分钟。染色后 PBS 洗涤一次,再在荧光显微镜下观察。
染色结果:
在蓝色荧光对红色荧光的散点图上,正常细胞呈低蓝光/低红光,凋亡细胞呈高蓝光/低红光,坏死细胞呈低蓝光/高红光。 注意事项:
1. 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液(C02-04003)。
2. 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。
3. Heochst 33342 与细胞孵育的时间不宜过长,一般控制在 20min 以内。太长容易引起 Heochst 33342 的发射光谱由蓝光向红光迁移,导致红色荧光与兰色荧光的比例改变。
4. 如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化后,制备成单细胞悬液,才可以进行检测。
5. PI 对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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