产品规格:1ml  1ml×5

保存条件:-20℃避光保存，有效期 6 个月。避免反复冻融。

简介

Hoechst 33258，也称 bisBenzimide H 33258 或 HOE 33258。Molecular formula：C25H24N6O·3HCl，MW：533.88，CAS：23491-45-4。是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258 也常用于普通的细胞核染色，或常规的 DNA 染色。
Hoechst 33258 的 激发波长为 346nm， 发射波长为 460nm；Hoechst 33258 和双链DNA 结合后， 激发波长为 352nm， 发射波长为 461nm。
Hoechst 33258 染色液浓缩液（100×, 1mg/ml），100 倍稀释后使用，一般推荐工作浓度为 1～5μg/ml，用于固定细胞或组织的细胞核染色。
使用说明：
(一) 固定的组织或细胞染色：
1. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的 Hoechst 33258 染色。
2. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液，混匀。室温放置 5-8 分钟。
3. 吸去 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。
4. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
(二) 活细胞染色：
1. 加入适当量 Hoechst 33258 染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入 1ml 染色液，对于 96 孔板一个孔需加入 100 微升染色液。
2. 在适宜于细胞培养的温度培养 20-30 分钟。吸去染色液，用无菌的 PBS 或培养液洗涤 2-3 次即可进行荧光检测。细胞发生凋亡时，在荧光显微镜下观察会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
注意事项：
1. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液(C02-04003)。
2. Hoechst 33258 对人体有害，请注意适当防护。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。