产品规格:5ml  25ml  100ml

保存条件:2-8°C保存，2年有效。

产品介绍：

rProtein A/G 琼脂糖填料 (rProtein A/G Beads 4FF) 是由高质量的 Recombination Protein A/G 高密度定向偶联到高度交联的琼脂糖凝胶微球表面，该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于 90%的抗体，操作简便高效。
本产品主要用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究，也可用于抗体固定及其它相关研究。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择微球的类别，Protein A，Protein G 和 Protein A/G 与不同抗体的亲和性比较参见表 2。
rProtein A/G 琼脂糖填料性能参数：

天然蛋白 A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白 G（Protein G）是一种分离自 G型或 C 型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的 Fc 区相互作用，可结合大多数哺乳动物的 IgG，但在两者结合特异性上有所不同（详见附表）。本品使用的是基因改造后的蛋白 A 和蛋白 G，不仅维持其本身的Ig 亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择微球的类别，Protein A，Protein G 和 Protein A/G 与不同抗体的亲和性比较参见附表。本品适用的范围广泛，可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。
操作流程：
缓冲液准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。
平衡/洗液：0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0
洗脱液：0.1M 甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH8.5
交联液：0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2
交联剂：DMP (dimetylpimelimidate dihydrochloride) (20 mM DMP 需要现用现配)
终止液：50 mM Tris, pH 7.5
一、免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP):
1. 蛋白样品的准备：
(1) 贴壁细胞：取 10 cm 细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS 洗涤 2 次，然后加入 500 μl 至 2 ml细胞裂解液裂解细胞（如 RIPA 裂解液）；2 / 4
Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
(2) 悬浮细胞：离心收集细胞后，PBS 洗涤 1 次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解；
(3) 动植物组织样本：参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解；
注：a. 具体的裂解方法，应参考不同裂解液的详细使用说明；b. 不同量的细胞，应选用适当裂解液的用量进行裂解（如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或 PBS 适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量），通常裂解液最终总蛋白浓度选择在 0.5-1ug/ul 范围内较合适；c. 可选：细胞或组织处理时加入广谱核酸酶 Benzonase，能够降解所有形式的 DNA 和 RNA(单链、双链、线形和环状)，而无蛋白水解活性。此步操作可以降低背景，保障实验的可重复性。
2. 去除非特应性结合（可选）：
(1) 取 0.2-1 ml 细胞或组织裂解液，蛋白量约为 0.2-1 mg，加入约 1 μg 和免疫沉淀时使用的 IgG 种属相同的普通 IgG 和 20 μl 充分重悬的 Protein A/G Agarose Resin 4FF，4℃缓慢摇动 30 min~2 h。
(2) 2500 rpm（约 1000g）离心 5min，取上清用于后续的免疫沉淀。
注：所谓种属相同的 IgG 是指与后续免疫沉淀用一抗宿主相同的正常 IgG。此步骤可以预先去除样本与 Protein A/G Agarose Resin 4FF 的非特异性结合，降低背景。
3. 免疫沉淀：
(1) 抗体吸附
① 取适量 Protein A/G Agarose Resin 4FF 加入到 2ml 离心管中，500rpm 离心 1min，吸弃上清。
② 加入 0.5ml 结合缓冲液重悬树脂，500rpm 离心 1min，吸弃上清。继续重复 2 次此操作。
③ 向上述已平衡树脂中加入抗体溶液，重悬树脂，室温下轻轻翻转离心管或置于翻转混合仪混匀 30min 后，500rpm 离心 1min，收集上清液，备用，待检测。
④ 向上述树脂中加入 0.5ml 的洗杂缓冲液，重悬树脂对其进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，500rpm 离心1min，吸弃上清。再重复 2 次。
(2) 抗体交联（可选）
注：如需将抗体和目标抗原复合物共同洗脱，请忽略此步骤。
① 向清洗过的树脂中加入 1ml 交联 Buffer，500rpm 离心 1min，吸弃上清。
② 再向其中加入 1ml 20mM DMP(Dimetyl pimelimidate dihydrochloride)的交联 Buffer，该试剂需现配现用，重悬树脂，室温下手动颠倒混匀或置于翻转混合仪轻轻翻转，促使 Buffer 和树脂充分接触，30min 后，500rpm 离心 1min，吸弃上清。
③ 再向其中加入 1ml 终止液，重悬树脂，终止交联反应，室温下手动颠倒混匀或置于翻转混合仪轻轻翻转15min，500rpm 离心 1min，吸弃上清。
④ 加入 0.5ml 洗杂缓冲液，重悬树脂，进行清洗，500rpm 离心 1min，吸弃上清。再重复 2 次。
(3) 沉淀反应
① 抗原吸附：向上述树脂-抗体溶液中加入含抗原的样品，用移液器轻轻吹打使抗原与树脂-抗体复合物分散均匀，室温下手动颠倒混匀或置于翻转混合仪轻轻翻转 10min，使抗原与抗体充分结合，如结合力较弱则可在室温下反应 1h 或者在 4℃下反应过夜。
② 洗杂：将上述完成抗原吸附的产物 500rpm 离心 1min，收集上清液置于冰上待检测。向离心管中加入 1ml 洗杂缓冲液，用移液器轻轻吹打使树脂-抗体-抗原复合物分散均匀，500 rpm 离心 1min，弃上清。重复 2 次， 加入 1ml 洗杂液，将树脂-抗体-抗原复合物转移至新的离心管中，500 rpm 离心 1min，吸弃上清。
4. 样品洗脱

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。