产品规格:1.1ml  1.1ml×5  1.1ml×10

保存条件: -20℃恒温避光保存两年，避免反复冻融。如经常使用，可置于 4℃保存至少六个月。

产品简介

本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行实时荧光定量 PCR 的专用 2×浓度预混液。产品含有优化浓度的 HotStart Taq DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分。主要用于基因组 DNA 靶序列和 RNA 反转录后 cDNA 靶序列的检测。HotStart Taq DNA
Polymerase 高温加热前，抗 Taq 单克隆抗体与 Taq 酶结合，抑制 Taq 酶的聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗 Taq 单克隆抗体在 PCR 反应 循环的变性步骤中已完全失活，不会阻碍之后的 Taq Polymerase 反应，大大提高了 PCR 反应的灵敏度及特异性。优化浓度的 SYBR Green I 荧光染料，特异性地掺入 DNA 双链后，荧光信号增强，而不掺入链中 SYBR Green I 染料分子荧光信号不变，从而保证荧光信号的增加与PCR 产物的增加完全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。
本产品为 2×预混荧光定量 PCR 反应体系，使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为 1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可 限度地减少人为误差、节约 PCR 实验操作时间、降低污染几率。

规格和组分

保存  -20℃恒温避光保存一年，避免反复冻融。如经常使用，可置于 4℃保存至少三个月。
注意事项
1. 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2. 尽可能减少 qPCR Green Fast Mixture 在光下的曝露时间，长时间的曝光可导致荧光信号减弱。
3. 反应液的配制、分装请一定使用无污染的枪头、Microtube 等，尽量避免交叉污染。
4. 本品不能用于杂交探针法。【使用方法】
用户需自备的试剂：cDNA 模板或 DNA 模板、引物请按照不同品牌荧光定量 PCR 仪的使用说明书要求进行试验操作。
操作示例：分别以 20ul 和 50ul PCR 反应体系为例
1. PCR 反应体系的建立：

1. 模板量：10~100 ng 基因组 DNA，或 1~10 ng cDNA 为参照，因不同物种的模板中含有目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定 的模板使用量。另外，two Step RT-PCR 反应的 cDNA（RT 反应液）作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。
2. 引物：通常引物浓度以 0.2uM 可以得到较好结果，可以终浓度 0.1~1.0uM 作为设定范围的参考。

扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降 低 引 物 浓 度，由此优化反应体系，为了获得理想的去 PCR 的效果，扩增片段的长度建议为 80~200bp。
3. 不同仪器所需 ROX Reference Dye 不同，或需要添加或不需要添加，请根据仪器说明进行操作。
4. 按照各仪器推荐体系进行反应液配制。
2. PCR 反应条件的设置
本制品中使用的 HotStart Taq DNA Polymerase 是利用抗 Taq 抗体封闭的 Hot Start DNA 聚合酶，如果在 PCR 反应前进行模板的预变性，通常设定为 95℃、2min，复杂或高 GC 模板适当延长时间至 5min。
该 DNA 聚合酶在 15 sec 内可完成至少 300bp 的扩增，可以满足绝大多数的 qPCR 实验；对于超过 350bp或者高 GC 含量的扩增子，建议增加延伸时间至 60sec 或者采用三步法以提高扩增效率。

注：以上举例为常规 qPCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定 反应条件，并根据此比例放大或缩小反应体系

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。