海藻糖酶(THL)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：

THL（EC 3.2.1.28）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。

测定原理：

THL 催化海藻糖产生葡萄糖，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰，以此反映 THL 活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 25ml×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 25ml×1 瓶，4℃保存；（若出现结冰现象，可 37℃水浴溶解后使用）
样品测定的准备：
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次）；8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL血清（浆）加入 1mL 提取液），冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。
2、 调节水浴锅至 95 度。
3、 工作液的配制：使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合，用多少配多少。
4、加样表（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

45℃水浴，准确反应 15min，95℃水浴 5 分钟终止反应，得混合液(若出现沉淀可 10000g 4℃离心 10min 后取上清)。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。