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柠檬酸合酶(CS)测试盒/分光光度法
起订量(盒)价格
1-52530 /盒
5-102440 /盒
≥102350 /盒
  • 品牌:联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/24样
  • 货号:LM-892813S
  • 发布日期: 2022-11-29
  • 更新日期: 2024-03-28
产品详请
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892813S
用途范围 CS催化乙醯CoA和草醯乙酸產生檸檬醯輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特徵吸光值。
纯度 99%
规格 50管/24样
是否进口

柠檬酸合酶(CS)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在於動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸迴圈 個限速酶,是三羧酸迴圈主要調控位點之一。

测定原理:

CS 催化乙醯 CoA 和草醯乙酸產生檸檬醯輔酶 A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的 DTNB 轉變成黃色的 TNB,在 412nm 處有特徵吸光值。
自备仪器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水
试剂组成和配制:
試劑一:液體 50mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:液體 10mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:液體 1mL×1 支,-20℃保存;
試劑四:液體 55mL×1 瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存;
試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 2.4mL 蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;
樣本的前處理:
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
① 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿 600g,4℃離心 5min。
③ 棄沉澱,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
④ 上清液即胞漿提取物,可用於測定從線粒體洩漏的 CS(此步可選做)。
⑤ 在步驟④的沉澱中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲3 秒,間隔 10 秒,重複 30 次),用於線粒體 CS 測定。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 412nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定
(1)在試劑五中加入 1.2mL 無水乙醇和 26mL 試劑四,混勻,37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)孵育 5min;用不完的試劑分裝後-20℃保存,禁止反復凍融;
(2)測定管:在 EP 管中加入 40μL 樣本、880μL 試劑五和 40μL 試劑六,混勻,37℃反應 15min 後立即測定吸光值 A1。

(3)對照管:在 EP 管中加入 40μL 樣本、880μL 試劑四和 40μL 試劑六,混勻,37℃反應 15min 後立
即測定吸光值 A2。
(4)計算ΔA=A1-A2,每個測定管設一個對照管。
CS 活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。
CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每 g 組織每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。
CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=23.8×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。
CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.0475×ΔA
V 反總:反應體系總體積,9.6×10-4 L;ε:TNB 摩爾消光係數,1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.04 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,15 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本品質,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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