苯丙氨酸解氨酶(PAL)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生 长 发 育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

测定原理：

PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 处有 吸收值，通过测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。
所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 40mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×3 瓶，4℃保存。临用前每瓶加入 4mL 蒸馏水水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

混匀，静置 10min 后，290nm 处记录测定管吸光值 A1 和对照管吸光值 A2，△A=A1-A2。注意：对照管只要做一管
PAL 活性计算
（1）按蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.1 为一个酶活性单位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷（Cpr× V 样）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr （2） 按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每 mL 反应体系中每 min 使 290nm 下吸光值变化 0.1 为一个酶活性单位。PAL（U/g鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，1.04mL； V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。