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乳酸脱氢酶(LDH)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
380 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/48样
  • 货号:LM-892588S
  • 发布日期: 2022-11-25
  • 更新日期: 2022-11-25
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892588S
用途范围 LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/48样
是否进口

乳酸脱氢酶(LDH)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着 NAD+
/NADH 之间互变。


测定原理:

LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂一:液体 5 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 10μL 试剂五和 1.3 mL 蒸馏水充分溶解备用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:液体 5 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 20 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂五:液体 100μL×1 支,4℃保存;

样品测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 1000~5000:1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在 EP 管中加入下列试剂)

2022112510054291158

2022112510055434540

充分混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确水浴 15min


2022112510061241715

充分混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确水浴 15min

2022112510063023116

充分混匀,室温静置 15min, 450 nm 下测定吸光度,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照管。
LDH 活力单位的计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.9108x+0.0037 (x 为标准品浓度,umol/mL;y 为ΔA)。
2、血清(浆)LDH 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0037)÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA
3、细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =73.2×ΔA÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/104 cell)= [(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔA
V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,15 min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细胞或细菌总数,2000 万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下:
1、标准条件下测定的回归曲线, y = 0.4554x+0.0037 (x 为标准品浓度,umol/mL;y 为ΔA)。
2、血清(浆)LDH 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0037)÷0.4554÷T×103=146.4×(ΔA-0.0037)
3、细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0037)÷0.4554×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =146.4×(ΔA-0.0037)÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA-0.0037)÷0.4554×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =146.4×(ΔA-0.0037)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/104 cell)= [(ΔA-0.0037)÷0.4554×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.073×(ΔA-0.0037)
V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,15 min;Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细胞或细菌总数,2000 万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
1、 标准曲线线性范围为:0.1 umol/mL -2 umol/mL。
2、 ΔA 线性范围为:0.01 -1。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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