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NADH氧化酶(NOX)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
798 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-892597S
  • 发布日期: 2022-11-25
  • 更新日期: 2022-11-25
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892597S
用途范围 NOX能够将NADH氧化为NAD,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

NADH氧化酶(NOX)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将 NADH 氧化为 NAD。该酶不仅参与 NAD 的再生,而且与免疫反应密切相关。



测定原理:

NOX 能够将 NADH 氧化为 NAD,NADH 的氧化与 2,6 二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的 DCPIP被还原为无色的 DCPIP,在 600nm 下测定蓝色 DCPIP 的还原速率计算出 NADH 氧化酶活性的大小。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水
 
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:液体 20mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 1.5mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂四:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 5mL 蒸馏水,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
 
样本的前处理: 
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
① 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g,4℃离心 5min。
③ 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11100g,4℃离心 10min。
④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的 NOX(此步可选做)。
⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或
200W,超声 3s,间隔 10 秒,重复 30 次),用于 NOX 活性测定。
血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤: 
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 600nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)试剂四于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min。
(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、200μL 试剂四和 40μL 试剂五,混匀,记录 600nm处 20s 时吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。

NOX 活力单位的计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清(浆)NOX 活力的计算:
单位的定义:每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/mL)=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T=2500×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 NOX 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/104 cell)=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V 反总:反应体系总体积,0.25mL; V 样:加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,0.202mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细胞或细菌总数,500万。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下:
1、血清(浆)NOX 活力的计算:
单位的定义:每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/mL)=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T=5000×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 NOX 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A600 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。
NOX(U/104 cell)=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.005÷T=2.02×ΔA
V 反总:反应体系总体积,0.25mL; V 样:加入样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,0.202mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量;500:细胞或细菌总数,500万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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