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乙醇脱氢酶(ADH)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
322 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-892601S
  • 发布日期: 2022-11-25
  • 更新日期: 2022-11-25
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-892601S
用途范围 ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

乙醇脱氢酶(ADH)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物 ADH 主要在肝脏生成,肝脏损伤导致 ADH 释放到血清中。血清 ADH 活性高低反映了肝 功 能是否异常。



测定原理:

ADH 催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD+,NADH 在 340nm 处有吸收峰,而 NAD+没有;测定 340nm吸光度下降速率,来计算 ADH 活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,室温保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2 瓶,-20℃保存。临用前加入 22mL 试剂二,现配现用。
试剂四:液体×1 支,4℃保存。
粗酶液提取:
1、 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
2、 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);16000g,4℃离心 20min,取上清液置冰上待测。
3、血清等液体:直接测定。
ADH 测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三在 25℃水浴中保温 30 min。
3. 在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 样本上清液、800μL 试剂三和 100μL 试剂四,迅速混匀后于 340nm测定吸光值变化,分别记录 15s 和 75s 时吸光值,分别记为 A1 和 A2。△A 测定管=A1-A2。
计算公式:
(1)按照蛋白浓度计算活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(Cpr×V 样)÷T=1608×△÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (nmol/min/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1608×△A÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃中每 104个细胞每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T=1608×△A ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总×109) ÷V 样÷T=1608×△A
ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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