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维生素B1测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
947 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-877010S
  • 发布日期: 2022-11-24
  • 更新日期: 2022-11-24
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-877010S
用途范围 VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾,亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝,在704nm有特征吸收峰。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

维生素B1测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

维生素 B1(Vitamin B1)是构成脱羧辅酶的主要成分,参与细 胞 代 谢中的三羧酸循环,是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素,在生物体能量代谢中有重要的作用。

测定原理:

VB1 在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾,亚铁氰化钾与 Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝,在 704nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 70mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 1mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 2mL×1 支,4℃保存。
试剂三:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存。
样本处理:
1. 组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30min)。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定。
3. 血清:直接测定。

测定操作:

2022112409361560680

2022112409362306964

计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.017x+0.0031,R2 = 0.9991;x 为标准品浓度:μg/mL;y 为△A(A 测定管-A 空白管)
1. 按照蛋白含量计算
VB1 含量(μg/mg prot)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷Cpr = 58.8×(△A-0.0031)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB1 含量(μg/g 鲜重)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(W÷V 样总) = 58.8×(△A-0.0031)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB1 含量(μg/104 cell)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(细胞数量÷V 样总) = 58.8×(△A-0.0031)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB1 含量(μg/mL)=(△A-0.0031)÷ 0.017 = 58.8×(△A-0.0031)
V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0085x +0.0031,R2 = 0.9991;x 为标准品浓度:μg/mL;y 为△A(A 测定管-A 空白管)
1. 按照蛋白含量计算
VB1 含量(μg/mg prot)=(△A -0.0031)÷ 0.0085÷Cpr = 117.65×(△A-0.0031)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB1 含量(μg/g 鲜重)=(△A-0.0031))÷ 0.0085÷(W÷V 样总) = 117.65×(△A-0.0031)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB1 含量(μg/104 cell)=(△A-0.0031)÷ 0.0085÷(细胞数量÷V 样总) = 117.65×(△A-0.0031)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB1 含量(μg/mL)=(△A-0.0031)÷ 0.0085 = 117.65×(△A-0.0031)
V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项:
1. 若测定结果中吸光值超过 2,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再重新测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 显色完成后立即进行测定。
4. 标准曲线线性范围为 0.1-10μg/mL。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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