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维生素B6测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
947 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-877008S
  • 发布日期: 2022-11-24
  • 更新日期: 2022-11-24
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-877008S
用途范围 VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在390nm有特征吸收峰。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

维生素B6测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

维生素 B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生:素,在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。

测定原理:

VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在 390nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制 :
提取液:液体 70mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 1mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
样本处理:
1. 组织:将样品磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定(动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟)。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定。
3. 血清:直接测定。 
测定操作:

2022112409434762122

计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.3635x+0.0205,R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6 含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷(V 样×Cpr) = 13.76×(△A - 0.0205)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6 含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷(V 样×W÷V 样总) = 13.76×(△A - 0.0205)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6 含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) = 13.76×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6 含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V 反总÷V 样 = 13.76×(△A - 0.0205)
V 反总:反应总体积,0.2mL;:V 样:加入样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1818x+0.0205,R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6 含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V 反总÷(V 样×Cpr) = 27.52×(△A - 0.0205)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6 含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818 ×V 反总÷(V 样×W÷V 样总) = 27.52×(△A - 0.0205)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6 含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) = 27.52×(△A - 0.0205)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6 含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V 反总÷V 样 =27.52×(△A - 0.0205)
V 反总:反应总体积,0.2mL;:V 样:加入样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项
1. 若测定结果中吸光值超过 1,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 蛋白浓度较高的样品,比如动物组织,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 显色完成后立即进行测定。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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