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产地 | 上海 |
品牌 | 联迈生物 |
货号 | LM-877012S |
用途 | VE还原Fe3+为Fe2+,Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物,在530nm有特征吸收峰。 |
包装规格 | 100T/48S |
纯度 | 99% |
CAS编号 | |
是否进口 | 否 |
维生素E测试盒/微量法说明书
测定意义:
维生素 E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是生物体中最主要的抗氧化剂之一,能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤,维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能,具有延 缓 衰 老、预 防 溶 血 性 贫 血 作 用,在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。
测定原理:
VE 还原 Fe3+为 Fe2+,Fe2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物,在 530nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、漩涡震荡仪。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 2mL×1 支,4℃保存。
试剂三:液体 2mL×1 支,4℃保存。
试剂四:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。
样本处理:
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,匀浆后用提取液定至 1mL,定至在漩涡混匀仪上震荡 5min,于 25℃,5000g 离心 10min,取上层测定。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min)后在漩涡混匀仪上震荡 5min,于 25℃,5000g 离心 10min,取上层测定。
3. 血清:取 0.1mL,加 0.9mL 提取液,漩涡仪混匀上震荡 5min,于 25℃,5000g 离心 10min,取上层测定。
测定操作:
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.22x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量计算
VE 含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷(V 样×Cpr) = 9.09×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VE 含量(μg/g)= (△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷(V 样×W÷V 样总) = 9.09×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VE 含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) = 9.09×(△A -0.0065)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VE 含量(μg/mL)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V 反总÷V 样×10 = 90.9×(△A -0.0065)
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.11x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量计算
VE 含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.11×V 反总÷(V 样×Cpr) = 18.18×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VE 含量(μg/g)= (△A -0.0065)÷0.11×V 反总÷(V 样×W÷V 样总) = 18.18×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VE 含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.11×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) = 18.18×(△A -0.0065)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VE 含量(μg/mL)=(△A -0.0065)÷0.11×V 反总÷V 样×10 = 181.8×(△A -0.0065)
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项:
若反应体系产生沉淀,需要将样品进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。