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糖原合成酶(GCS)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
970 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-877002S
  • 发布日期: 2022-11-24
  • 更新日期: 2022-11-24
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-877002S
用途范围 GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映GCS活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

糖原合成酶(GCS)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

GCS(EC 2.4.1.11)催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UTP,以 α-1,4-糖苷键相连延长糖链,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰岛素作用的主要靶酶,对糖代谢的调 节 和 血 糖 稳 态 的 维 持 具 有 重 要 作 用。

测定原理:

GCS 催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UDP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化 NADH 氧化生成 NAD+,在 340nm 下测定 NADH 下降速率,即可反映 GCS 活性。

需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 45 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 41μL×1 支,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支, -20℃保存;
试剂五:粉剂×1 瓶, -20℃保存;

样本的前处理:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 工作液的配制:临用前将试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、 试剂五的配制:临用前在试剂五瓶中加入 2.5mL 试剂二充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
4、 将工作液和试剂五置于 37℃预热 5 分钟。
5、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本、50μL 试剂五和 900μL 工作液,立即混匀,记录 340nm 处初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。
注意:在该试剂盒中,若 ΔA 大于 0.1,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使 ΔA 小于 0.1 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

GCS 活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCS(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GCS(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=3215×ΔA÷W
V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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