组织无机磷含量测试盒/微量法说明书

测定意义：

无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等，此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。

测定原理：

钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定 660nm 光吸收，即可计算无机磷含量。
自备仪器和用品：
离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 10 mL 蒸馏水，充分溶解后加入试剂二（全部），混匀。
标准品：液体×1 支。
无机磷提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3. 空白管：取 0.5mL EP 管，依次加入 100μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4. 标准管：取 0.5mL EP 管，依次加入 10μL 标准液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5. 测定管：取 0.5mL EP 管，依次加入 10μL 上清液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
组织无机磷含量计算：
（1） 按照蛋白含量计算
无机磷含量(μmol/mg prot)= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷Cpr=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷Cpr

(2) 按照样本质量计算
无机磷含量(μmol/g 鲜重 )= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：1mmol/L；V 总：上清液总体积，1mL=0.001 L；W：样品质量，g。
注意事项：
1. 试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。
2. 40min 内完成比色。
3. 检出限为 10μmol/L。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。