高铁还原酶(FCR)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：

高铁还原酶（ferric-chelate reductase,FCR）催化高价铁螯合物中的 Fe3+还原为 Fe2+，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。

测定原理：

FCR 催化 Fe3+还原为 Fe2+，Fe2+和 ferrozine 反应显色，在 562nm 下有特征吸光值。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存;
试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存;
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：水 mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 562nm，蒸馏水调零。
2、 工作液配制：将试剂一、二、三以 1:1:1 的比例混合。临用前配制，用多少配多少
3、 在 1mL 玻璃比色皿中，加入 250μL 样本上清和 750μL 工作液，混匀，记录初始吸光值 A1 和 30min 后的吸光值 A2。ΔA=A2-A1。
FCR 活性计算公式：
标准曲线：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997；
（1）按样本质量计算
单位定义：每 g 样本每分钟产生 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位。
FCR（nmol/min/g 鲜重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V 标÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 4.166×（△A-0.0011）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 蛋白每分钟产生 1nmolFe2+-ferrozine 定义为一个酶活力单位。
FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 标÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T =4.166×（△A-0.0011）÷Cpr

V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，250μL；V 标：加入标准品体积 ，250μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000，μmol 到 nmol 的转换系数。

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