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莽草酸脱氢酶(SD)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
855 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876950S
  • 发布日期: 2022-11-23
  • 更新日期: 2022-11-23
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876950S
用途范围 莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH,检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

莽草酸脱氢酶(SD)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

莽草酸途径是存在于植物、真菌和微生物中的一条重要的代谢途径,莽草酸脱氢酶是莽草酸合成途径中的关键酶。

测定原理:

莽草酸脱氢酶催化莽草酸和 NADP 产生 NADPH,检测 340nm 下的吸光值增加速率来表示 SD 活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
 
试剂组成和配制: 
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2 瓶,4℃保存;
 
粗酶液提取: 
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
 
测定步骤: 
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)在试剂二中加入 25mL 试剂一充分溶解混匀,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴5min,现配现用。
(2)取 0.05mL 样本和 0.95mL 试剂二于 1mL 比色皿中,混匀,在 340 nm 波长下立即记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A2-A1。

SD 活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol /min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V×样 Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol /min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟每分钟产生 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
SD(nmol /min /104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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