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锰过氧化物酶(MnP)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
352 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876963S
  • 发布日期: 2022-11-23
  • 更新日期: 2022-11-23
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876963S
用途范围 锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

锰过氧化物酶(MnP)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。

测定原理:

锰过氧化物酶在 Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在 465nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制 :
试剂一:液体 75mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 11mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
酶液提取:
1. 组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 4℃,10000g离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体:直接检测。
测定操作:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 465nm,蒸馏水调零。
2、 测定前将试剂一、二、三、四在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)放置 10min 以上。
3、 样本测定表

2022112309013532564

在 1 mL 玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录 465nm 下 30s 时的吸光值 A1 和 2min30s后的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。
注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液,在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)放置 10min 以上,测定时加入 100μL 样本和 900μL 混合液测定。
酶活计算公式:
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克样品每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性(nmol/min/g 鲜重)= [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109] ÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 413×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义:每 104个细胞每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109] ÷(V 样×细胞数量÷V 样总)÷T= 413×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义:每毫升培养液每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP 活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T= 413×ΔA
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,1×10-3L;V 样:反应中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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