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脱氢酶(DHA)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
510 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876965S
  • 发布日期: 2022-11-23
  • 更新日期: 2022-11-23
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876965S
用途范围 在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

脱氢酶(DHA)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶,催化底物通过细胞色素系统被氧化,释放的能量供机体使用,是生物体取得能量的一种方式。

测定原理:

在细胞呼吸过程中,氢受体 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF 呈现红色,在波长 485nm 处有 吸收峰,采用分光光度法于 485nm 测定其吸光值,即得脱氢酶活性。
自备实验仪器及用品:
筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存
试剂一:粉剂×1 瓶,使用前加 10mL 试剂二溶解,4℃避光保存(尽量现配现用)。
试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:甲醇,自备。
样品处理:
1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃,离心 20min。
3. 液体:直接检测。
测定步骤和操作表:

2022112308552916247

2022112308553995845

脱氢酶活力计算:
标准曲线:y = 0.0422x - 0.0312;R2 = 0.9988;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活单位定义:在 37℃时,每 mg 蛋白样品每 min 催化产生 1μgTF 为一个酶活性单位。
DHA(μg/ min / mg prot)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义:在 37℃时,每克样品每 min 催化产生 1μgTF 为一个酶活性单位。
DHA(μg/ min /g 鲜重)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷W
3. 按液体体积计算
酶活单位定义:在 37℃时,每 mL 样本每 min 催化产生 1μgTF 为一个酶活性单位。
DHA(μg/ min /mL)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V 反总÷V 样÷T= 0.181×(△A+0.0312)
V 反总:反应总体积,1.65mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.15mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g; Cpr:蛋白浓度,mg/mL。
注意事项:
配制好的试剂一避光保存于 4℃, 在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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