单胺氧化酶(MAO)测试盒/分光光度法说明书

测定意义：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝 纤 维 化的程度。此外，MAO 活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，从而引发多种病 症。

测定原理：

MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在 360nm 处有特征吸收峰，测定 360nm光吸收下降的速率，计算 MAO 活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液一）进行冰浴匀浆，10000g，4℃，离心 10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心 30min，弃上清；加入 1.0 mL 预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的 1.0 mL 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）取上清置于冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后10000g，4℃，离心 10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管10000g，4℃，离心 30min，弃上清；加入 1.0 mL 预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心 40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定），取上清置于冰上待测。
3. 血清：直接测定。
测定操作表：

ε：底物摩尔消光系数，1.46 L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，
W：样本质量，g
注意事项：
1、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。

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