单胺氧化酶(MAO)测试盒/微量法说明书

测定意义：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝 纤 维 化的程度。此外，MAO 活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，从而引发多种病 症。

测定原理：

MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在 360nm 处有特征吸收峰，测定 360nm光吸收下降的速率，计算 MAO 活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 2mL×1 管，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 称取约 0.1g 样品，加 1 mL 预冷的提取液一充分冰浴匀浆，1000g，4℃，离心 10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心 30min，弃上清；加入 1mL 预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心 40min，弃上清；沉淀加入预冷的 1mL 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后10000g，4℃，离心 10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管10000g，4℃，离心 30min，弃上清；加入 1.0 mL 预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心 40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定），取上清置于冰上待测。
3. 血清：直接测定。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 360nm。
2、 操作表

b．用 96 孔板测定的计算公式如下
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每毫克蛋白质 1min 内转化 1 nmol 底物的酶量为一个酶活单位。

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