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乙酸激酶(ACK)测试盒/分光光度法
物品单位 价格 品牌
1487 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:50管/48样
  • 货号:LM-876976S
  • 发布日期: 2022-11-22
  • 更新日期: 2022-11-22
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876976S
用途范围 (1)ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸,(3)乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下测定NADH氧化生成NAD+速率,即可反映ACK活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 50管/48样
是否进口

乙酸激酶(ACK)测试盒/分光光度法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

ACK 主要存在于微生物中,催化乙酸和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。

测定原理:

(1)ACK 催化乙酸钠和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP,(2)丙酮酸激酶催化 ADP 和 PEP 生成 ATP 和丙酮酸,
(3)乳酸脱氢酶催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+,(4)在 340nm 下测定 NADH 氧化生成 NAD+速率,即可反映 ACK 活性。

需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 1.2mL×1 支,4℃保存;

样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定
(1)工作液的配置:临用前取试剂二一瓶,加入 25mL 试剂一和 500μL 试剂三,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;现配现用;
(2)在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 样本和 900μL 工作液,混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值A1 和 3min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。
ACK 活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=536×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK(nmol/min /g 鲜重)= [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=536×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ACK(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.072×ΔA
V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,3 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。

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