木质素过氧化物酶(LiP)测试盒/微量法说明书

测定意义：

木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

测定原理：

木质素过氧化物酶催化天青脱甲基，在 651nm 处测定吸光值减少。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、低温离心机、酶标仪、96 孔板、可调式移液器、冰。
试剂组成和配制： 
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 115mL 蒸馏水，充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存一个月。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 5mL×1 支，4℃保存。
酶液提取：
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。 
测定操作：
1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 651nm。
2、临用前按每个样本试剂一：试剂二：试剂三=80:40:40（μL）的比例配制工作液，现配现用。
3、在 96 孔板中依次加入如下试剂

酶活计算公式：
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。

LiP 活性（U/mg prot）= ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。
LiP 活性（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =250×ΔA÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。
LiP 活性（U/104 cell）=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T=0.5×ΔA
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。
LiP 活性（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =250×ΔA
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。