土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)测试盒/微量法说明书

测定意义：

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调 节 游 离 氨  量 和 尿 素 代 谢。

测定原理：

S-GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。

试剂组成和配制：
试剂一×1 瓶，15 mL，4 ℃保存；
试剂二×1 瓶，40 mL，4 ℃保存；
试剂三×1 瓶，60 mL，常温保存；
试剂四×1 瓶，5 mL，常温保存；
试剂五×1 瓶，3 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，3 mL，常温避光保存。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在 EP 管中加入下列试剂）：

振荡混匀，室温放置 15min

混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，依次加入下列试剂

混匀，室温静置 15min，420nm 处读取测定管和对照管吸光值，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。
注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
酶活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 3.8488x+0.0057；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值 A。
单位定义：每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（nmol/min/g 土样）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反总÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。
V 反总：反应体系总体积：1.05mL；T：反应时间，2h=120min；W：样本质量，g; 1000，μmol 到 nmol 换算系数。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 1.9244x+0.0057；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值 A。
单位定义：每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（nmol/min/g 土样）＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V 反总÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。
V 反总：反应体系总体积：0.525mL；T：反应时间，2h=120min；W：样本质量，g; 1000，μmol 到 nmol 换算系数。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。