土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)测试盒/微量法说明书

测定意义：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理：

酸性条件下，S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在 680nm 有特征吸收峰。
所需仪器及设备：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、双蒸水
试剂组成和配置：
液体一：1mL×1 支，4℃保存。
液体二：0.5mL×1 支，4℃保存。
试剂一的配制：临用前按液体一：液体二：蒸馏水=140（μL）：20（μL）：21（mL）的比例配制，现配现用，如出现白色絮状沉淀则不能用。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 6ml 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2mL 试剂七，沸水浴加热溶解，然后加入 8ml 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 30ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂五：液体 8mL×1 瓶，4℃保存；
试剂六：液体 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液，4℃保存；
试剂七：液体 5mL×1 支，4℃保存；
 
样品处理： 
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。
测定操作：
1、 试剂一的配制：见试剂的组成和配制。
2、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。
3、样本测定：

混匀，40℃水浴 20min，8000g 25℃离心 10min，取上清液 200μL，680nm 下读取各管吸光值 A
注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ACPT 活性计算：
单位定义：每天每 g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-ACPT 活力单位。
S-ACPT(mg/d/g 土样)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=24×(A 测定管-A 对照管)÷A标准管
C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.2mL；T：反应时间，30min=1/48d；
W：样本质量，0.02g。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。