土壤总磷/有机磷/无机磷含量测试盒/微量法说明书

测定意义：

土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。

测定原理：

利用钼蓝法定磷。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉、蒸馏水、100 目筛子（可更小）。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。临用前用蒸馏水稀释 10 倍后再用。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 8mL 蒸馏水，充分溶解后加入 4mL 试剂二，混匀。
标准品：液体×1 支，20 μmol/L 无机磷标准品，4℃保存。
土壤不同形态磷提取：
1.无机磷：称取通过 100 目筛子的风干土样 0.01g，转移到 1mL 离心管，加入 1mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃离心 10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。
2.总磷提取：取通过 100 目筛子的风干土样，550℃灼烧 1h，冷却后称取约 0.01g，转移到 1 mL 离心管，加入 1mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃离心 10min，取上清液二，用于总磷含量测定。
测定步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3. 空白管：取 EP 管，依次加入 100μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4. 标准管：取 EP 管，依次加入 10μL 标准液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5. 测定管：取 EP 管，依次加入 10μL 上清液一或者上清液二，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
土壤磷含量计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.土壤无机磷含量（μmol /g 干重）=[C 标准液×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)]×V 总÷W=0.02×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)÷W
C 标准液：20 μmol/L； W：土壤样品质量，g； V 总：上清液一总体积，1 mL=0.001 L。
2.土壤总磷含量（μmol /g 干重）=[C 标准液×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)]×V 总÷W=0.02×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)÷W
C 标准液：20 μmol/L；W：土壤样品质量，g；V 总：上清液二总体积，1mL=0.001 L。
3.土壤有机磷（μmol /g 干重）=土壤总磷-土壤无机磷
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
1.土壤无机磷含量（μmol /g 干重）=[C 标准液×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)]×V 总÷W=0.02×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)÷W
C 标准液：20 μmol/L； W：土壤样品质量，g； V 总：上清液一总体积，1 mL=0.001 L。2. 土壤总磷含量
（μmol /g 干重）=[C 标准液×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)]×V 总÷W=0.02×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)÷W
C 标准液：20 μmol/L；W：土壤样品质量，g；V 总：上清液二总体积，1mL=0.001 L。
3．土壤有机磷（μmol /g 干重）=土壤总磷-土壤无机磷
注意事项：
试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。