土壤汞(S-Hg)浓度测试盒/微量法说明书

测定意义：

土壤汞污染能够通过食物链传递和富集，对植物、动物和人类健康产生威胁。矿山开发、工业加工、农业生产和生活垃圾常常造成土壤汞污染，因此评价和防止土壤重金属污染常常需要测定土壤汞含量。

测定原理：

土壤经消化后，汞以 Hg2+离子形式存在；Hg2+能与二硫腙生成橙色络合物，溶于三氯甲烷后，在 490nm 测定吸光度，即可计算 S-Hg 含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、可调式移液枪、100 目筛（可更小）、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、三氯甲烷和蒸馏水。
试剂组成和配制：
标准品：液体×1 支，4nmol/mL Hg 标准液，4℃保存。
试剂一：自备。在该试剂瓶中加入 52mL 蒸馏水，36 mL 浓盐酸，12mL 浓硝酸，混匀，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 18.4 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 3 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1 支，4℃保存。临用前加 1.5 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 5.2 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂六：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 20 mL 三氯甲烷充分溶解。
S-Hg 检测：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，体积波长到 490 nm，三氯甲烷调零。
2. 样品管：风干的土壤，过 100 目筛后 称取 0.1 g 左右，装入 EP 管；加入 1 mL 试剂一，充分混匀后沸水浴消化 60 min。取出冷却后室温 8000g 离心 10min，吸取 20 μL 上清液加入新的 EP 管；再先后加入 180μL 蒸馏水和 20 μL 浓硫酸，混匀； 加入 180 μL 试剂二，混匀后 40℃水浴 24h，期间震荡数次。
2. 标准管：取 EP 管，加入 20 μL 标准液，180 μL 蒸馏水和 20 μL 浓硫酸，混匀； 加入 180 μL 试剂二，混匀后 40℃水浴 24h，期间震荡数次。
3. 加入 20 μL 试剂三，震荡直到无色；开盖静置 30min，期间摇荡数次，以排出气体。
4. 加入 10 μL 试剂四，充分混匀后静置 5min；加入 50μL 试剂五，盖紧后震荡至少 1min，静置 10min 以分层。
5. 小心吸取 20 μL 下层溶液，加入 200 μL 试剂六，震荡使无色，静置 10 min 以分层。
6. 小心吸取 140 μL 下层溶液，加入微量玻璃比色皿/96 孔板，于 490nm 处比色，记录各管吸光值。记为 A样品管和 A 标准管。
注意：标准管只需测定一次。

S-Hg 浓度计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
Hg（nmol Hg/g 干重）=[C 标×(A 测定管÷A 标准管)]×V 总÷V 样÷W=200×(A 测定管÷A 标准管)÷W
C 标：标准液浓度，4 nmol/mL Hg；V 总：上清液总体积，1 mL；W：土样质量，g；V 样：加入上清液体积，20 μL=0.02 mL。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
Hg（nmol Hg/g 干重）=[C 标×(A 测定管÷A 标准管)]×V 总÷V 样÷W=200×(A 测定管÷A 标准管)÷W
C 标：标准液浓度，4 nmol/mL Hg；V 总：上清液总体积，1 mL；W：土样质量，g；V 样：加入上清液体积，20 μL=0.02 mL。
注意事项：
1、试剂一有刺激性气味，易挥发，实验过程中应注意佩戴口罩和手套，使用完立即盖好盖子，以免试剂不够；
2、测定过程中需加入浓硫酸，加浓硫酸时需注意，避免溅到皮肤或眼睛上；
3、静置分层后，用 1mL 移液枪，排除空气后，轻轻插入下层溶液中，缓慢吸取下层溶液。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。