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细胞色素b5含量测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
452 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100T/96S
  • 货号:LM-876794S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876794S
用途范围 氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后,在424nm处有最大吸收峰,通过测定424nm和490nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。
纯度 99%
CAS编号
规格 100T/96S
是否进口

细胞色素b5含量测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素 P450 和细胞色素 b5 是 P450 酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与 P450 代谢活性密切相关。

测定原理:

氧化型细胞色素 b5 经连二亚硫酸钠还原后,在 424nm 处有 吸收峰,通过测定 424nm 和 490nm 处吸光值的差异,即可计算出细胞色素 b5 的含量。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×2 瓶,4℃保存。临用前各加 100mL 蒸馏水,充分溶解。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。
工作液配制:临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂三瓶盖,加试剂二 20mL 充分溶解,4℃避光可保存 1 周。
样品中细胞色素 b5 提取:
1、除去细胞核,线粒体等大分子物质:称约 0.5g 组织,加入 1mL 试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心 30min,取上清液,转入超速离心管中。
2、粗制微粒体:100 000g,4℃离心 60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g 离心 30min,弃上清液。
4、待测液:向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5mL,盖紧后充分震荡溶解,即待测液,该待测液需当天测定。
细胞色素 b5 含量测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min。
2. 工作液置于 25℃水浴中预热 30 min。
3. 空白管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 10 μL 蒸馏水,200μL 工作液,室温静置 2 min,424nm 和 490nm 处吸光值,424nm 处吸光值记为 A 空白管 1,490nm 处吸光值记为 A 空白管 2。△A 空白管= A 空白管 1- A空白管 2
4. 测定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 10 μL 待测液,200μL 工作液,室温静置 2 min,424nm 和 490nm 处吸光值,424nm 处吸光值记为 A 测定管 1,490nm 处吸光值记为 A 测定管 2。
△A 测定管= A 测定管 1- A 测定管 2。

注意:只需要做一个空白管。
样品细胞色素 b5 含量计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
细胞色素 b5 含量(nmol/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样) = 122.8×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
细胞色素 b5 含量(nmol/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×(V 样总÷V 样)÷W = 61.4×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
ε:还原型细胞色素 b5 纳摩尔消光系数,171×10-6 L/nmol/cm;d:比色皿光径(cm),1cm; V 反总:反应体系总体积,210 μL =2.1×10-4 L;Cpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V 样:加入反应体系中待测液体积,10 μL=0.01 mL;V 样总:待测液总体积,0.5 mL;W:样品质量(g)。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
细胞色素 b5 含量(nmol/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样) = 245.6×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
细胞色素 b5 含量(nmol/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×(V 样总÷V 样)÷W = 122.8×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
ε:还原型细胞色素 b5 纳摩尔消光系数,171×10-6 L/nmol/cm;d:96 孔板光径(cm),0.5cm; V 反总:反应体系总体积,210 μL =2.1×10-4 L;Cpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V 样:加入反应体系中待测液体积,10 μL=0.01 mL;V 样总:待测液总体积,0.5 mL;W:样品质量(g)。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。


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