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NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)测试盒/微量法
物品单位 价格 品牌
1085 联迈生物
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:LM-876802S
  • 发布日期: 2022-11-17
  • 更新日期: 2022-11-17
产品详细说明
产地 上海
品牌 联迈生物
货号 LM-876802S
用途范围 NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C,还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。
纯度 99%
CAS编号
规格 100管/96样
是否进口

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)测试盒/微量法说明书

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR 作为 P450 酶系的重要一员,催化氧化型 P450 还原再生。

测定原理:

NCR 催化 NADPH 还原氧化型细胞色素 C,还原型细胞色素 C 在 550nm 处有特征吸收峰;通过测定 550nm吸光度的增加速率,来计算 NCR 活性。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:粉剂×2 瓶,4℃保存。临用前根据用量每瓶加 100mL 蒸馏水充分溶解。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 管,-20℃保存。临用前配制,加 1.04 mL 蒸馏水充分溶解,4℃保存。
试剂四:粉剂×1 管,4℃保存。临用前配制,加 1100 μL 蒸馏水充分溶解,4℃保存。
粗酶液提取:
1、除去细胞核和线粒体等:称约 0.5g 组织,加入 4℃预冷的 1 mL 试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心 30min,取上清液,转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心 60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤 2 的沉淀中加 1 mL 试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g 离心 30min,弃上清液。
4、最终微粒体:向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。
NADPH-细胞色素 C 还原酶测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 550 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在 37℃水浴中预热 30min。
3. 空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 10μL 蒸馏水、180μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂
四,迅速混匀后于 550nm 处测定 2min 内吸光值变化,第 10s 和第 130s 吸光值。△A 空白管=A2-A1。
4. 测定管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 10μL 提取液、180μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂
四,迅速混匀后于 550nm 处测定 2min 内吸光值变化,第 10s 和第 130s 吸光值。△A 测定管=A4-A3。
注意:空白管只需做一次。
NCR 活性计算公式公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 还原型细胞色素 C 为 1 个酶活单位。
NCR ((nmol/min /mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T= 550×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:37℃中,每克组织每分钟催化产生 1μmol 还原型细胞色素 C 为 1 个酶活单位。
NCR ((nmol/min/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T=275×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
ε:还原型细胞色素 C 摩尔消光系数,19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm;d:比色皿光径(cm),1cm;V
反总:反应体系总体积(L),210μL=2.1×10-4L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),10μL=0.01mL;V 样总:提取液体积,0.5 mL;T:反应时间(min),2min 。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 还原型细胞色素 C 为 1 个酶活单位。
NCR ((nmol/min/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T= 1100×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:37℃中,每克组织每分钟催化产生 1μmol 还原型细胞色素 c 为 1 个酶活单位。
NCR ((nmol/min/g 鲜重) = (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 550×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
ε:还原型细胞色素 C 摩尔消光系数,19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm;d:96 孔板光径(cm),0.5cm;
V 反总:反应体系总体积(L),210μL=2.1×10-4L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;
V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),10μL=0.01mL;V 样总:提取液体积,0.5mL;T:反应时间(min),2min 。
注意事项:
试剂三、试剂四临用前配制,配好未使用完的 4℃可保存两天。

本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。


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