总糖含量测试盒/微量法说明书

测定意义：

糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新 陈 代 谢的主要原料和贮存物质。总糖也可称为碳水化合物，包括可溶性的单糖，二糖以及不溶性的淀粉，纤维素，几丁质等。

测定原理：

总糖酸水解为还原糖，在 NaOH 和丙三醇存在下，DNS 试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物，在过量的 NaOH 碱性溶液中呈桔红色，在 540nm 处有 吸收峰，以此测定样品中的总糖含量。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。

试剂的组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 100mL×1 瓶 ，4℃保存；
试剂三：液体 5mL×1 瓶 ，4℃避光保存；

样品中总糖的提取：
组织：称取约 0.1g 样品，加入 1mL 试剂一，1.5mL 蒸馏水，匀浆，95℃水浴中加热 30min，加入 1mL 试剂二，混匀，用蒸馏水定容至 10mL，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）液体样本：取 0.1mL 样本，加入 1mL 试剂一，1.5mL 蒸馏水，匀浆，95℃水浴中加热 30min，加入 1mL 试剂二，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、加样表：

混匀，540nm 测定吸光值，ΔA=A 测定管-A 空白管
注意：1、空白管只要做一管。
2、如果 ΔA 大于 2，需要将上清液用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
总糖含量计算：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.3002x - 0.0507；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、按样本鲜重计算：
总糖（mg /g 鲜重）= [(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（W×V1÷V2）×稀释倍数=33.311×(ΔA＋0.0507) ÷W×稀释倍数。
3、按样本蛋白浓度计算：
总糖（mg /mg prot）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀释倍数=3.3311×(ΔA＋0.0507) ÷Cpr×稀释倍数。
V1：加入样本体积，0.008mL；V2：加入提取液体积，10mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
4、按照液体体积计算：
总糖（mg /mL）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（V3×V1÷V2）×稀释倍数=116.59×(ΔA＋0.0507)×稀释倍数。
V1：加入样本体积，0.008mL；V2：加入提取液体积，10mL/3.5mL； V3:液体样本，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
注意： 检测限为 1mg/g 鲜重或 10ng/mg prot

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